[发明专利]一种基于分子生物试验用的自动合成引物的方法

说明书

本发明公开了一种基于分子生物试验用的自动合成引物的方法，包括以下步骤，S1，一次混合反应：自动合成引物过程中，将反应试剂通过加液的泵体输入至预反应使用的混合器中，接着将试剂利用加热恒温器预热后，再经泵体由反应器中反应柱的底部根据设定的稳定流速经过反应柱进行反应，然后将反应柱反应后的试剂再投入至混合器中进行循环的反应处理，通过分析或设定的时间，多次反应后停止循环，试剂进行排放，反应进入下一个阶段。本发明通过逆流、循环、连续流并预热的方式，使反应更充分，清洗更彻底，提高合成产物纯度，突变率更低，降低生产时间，降低试剂使用量，更环保，生产成本更低，无需人工干预，节省人工成本。

技术领域

本发明涉及分子生物试验技术领域，尤其涉及一种基于分子生物试验用的自动合成引物的方法。

背景技术

随着分子生物学技术的发展，包括药物研发、遗传病和感染性疾病诊断、基因研究、聚合酶链式反应(PCR)和杂交试验都需要大量的DNA片段，这些DNA片段大都需要人工合成。DNA合成的片段常常有不同的表述方法，比如寡核苷酸、PCR引物、接头、探针、短链引物和长链引物等。

目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法，目前主流的引物合成仪有Dr.Oligo、MerMade、ABI3900和Oligo Maker等，所有这些合成仪均采用间歇反应釜的方法，即每一步反应将反应试剂通过加液泵或惰性气体压力的方式，这种方法使试剂进入反应载体的孔隙主要靠渗透作用，效率很低，时间较长。

如附图说明中图2所示，每个步骤加试剂的动作，会使反应载体不断旋转，降低了合成试剂在孔隙中流动的效率，同时由于液体是由上向下流动，在管壁效应的作用下，每个孔隙的反应条件是不同的，这样就造成了反应的不均一性。为了提高反应的程度和收率，只能通过增加反应时间和加入过量的反应试剂，但这样不经造成了各种反应试剂的浪费，增加了化学废液的总量，而且并没有从根本解决问题。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种基于分子生物试验用的自动合成引物的方法。

本发明提出的一种基于分子生物试验用的自动合成引物的方法，包括以下步骤：

S1：一次混合反应：自动合成引物过程中，将反应试剂通过加液的泵体输入至预反应使用的混合器中，接着将试剂利用加热恒温器预热后，再经泵体由反应器中反应柱的底部根据设定的稳定流速经过反应柱进行反应，然后将反应柱反应后的试剂再投入至混合器中进行循环的反应处理，通过分析或设定的时间，多次反应后停止循环，试剂进行排放，反应进入下一个阶段；

S2：进样混合模式：S1中的加入混合器中的步骤为进样混合，利用多种试剂按照投放顺序，通过计量泵投入至混合器中，其中投放量均可控；

S3：循环流模式：S1中的混合器和反应器之间的循环反应步骤，利用混合器中试剂进入反应器反应后，再投入至混合器中，每次循环都经过加热恒温器预热反应；

S4：往复逆流模式：在进行循环反应过程中，往复逆流模式通过泵体的往复输入方向变化，将反应试剂和循环试剂之间往复在反应器和混合器之间，在反应器和混合器的每次交流过程中均需要通过恒温器加热；

S5：循环流模式：在进行循环反过程中，循环流模式为试剂通过进入反应器后，直接注入至混合器中，不通过泵体输出至混合器中，直至反应结束后废液排出，进行下阶段试验。

作为本发明中进一步方案，所述S1中反应试剂投入使用的泵体为计量泵，可精准计量投入量，便于分子生物试验中不同试剂的计量投入作业。

作为本发明中进一步方案，所述S1中的混合器和反应器之间的连接泵体为恒流泵，其可顺逆向实现试剂运输。

作为本发明中进一步方案，所述S1-S4中的加热恒温器为套管式结构，且加热恒温器固定于混合器和反应器之间的连接管道外壁上。

本发明中的有益效果为：