[发明专利]一种酿酒酵母表达长效重组人丝聚蛋白及其应用

说明书

本发明公开了一种酿酒酵母表达长效重组人丝聚蛋白及其应用，该长效重组人丝聚蛋白的核苷酸序列如Seq ID NO.1所示，该长效重组人丝聚蛋白的核苷酸序列所对应的氨基酸序列如Seq ID NO.2所示。长效重组人丝聚蛋白的氨基酸序列包括丝聚蛋白的氨基酸序列及人血清白蛋白的氨基酸序列，丝聚蛋白的氨基酸序列包括丝聚蛋白核苷酸序列重复单元C端的一个单体结构所对应的氨基酸序列。本发明提供的长效重组人丝聚蛋白能够促进角蛋白中间丝聚集并促进中间丝之间的二硫键形成、防止表皮水分的丢失和外界过敏物质的入侵以及降低紫外线诱导的表皮细胞凋亡的敏感性。融合HAS有效的提高了重组蛋白的稳定性。

技术领域

本发明涉及新兴生物医学领域，尤其涉及一种酿酒酵母表达长效重组人丝聚蛋白，一种酿酒酵母信号肽重组质粒，一种酿酒酵母分泌表达载体，一种酿酒酵母营养缺陷型菌株，以及一种酿酒酵母表达长效重组人丝聚蛋白在保湿化妆品中的应用。

背景技术

丝聚蛋白(filaggrin，FLG)又称中间丝聚合蛋白，相对分子质量约35000，主要存在于表皮颗粒层和透明层。它的前体丝聚蛋白原是一个高度磷酸化、富含组氨酸、不溶于水且无活性的多肽，相对分子质量约435000。丝聚蛋白原的编码基因FLG位于表皮分化复合体内，分子起始端是一个N端区域，该区域有一个钙结合结构和核定位元件，N端区域之后是10～12个几乎相同的FLG单体结构，此重复结构具有角蛋白绑定属性，其末端是C端(结合图2所示)。丝聚蛋白及其降解产物和衍生物是皮肤的天然保湿因子，对维持皮肤正常pH值、调节蛋白酶活性、表皮屏障的通透性及皮肤对微生物的防御功能起关键作用，对维持角质层水合作用非常重要。

人血清白蛋白(Human serum albumin，HAS)是人体血液中的主要蛋白，由585个氨基酸构成，是人体循环系统内的含量最多的可溶性蛋白，在血液中的浓度为34～54g/L。HSA由肝脏合成，血清半衰期长，可达19天。HSA在调节血液渗透压、营养和促进伤口愈合等方面发挥重要作用，广泛用于肝硬化腹水、烧伤、休克等临床治疗。此外，HSA具有无免疫原性、人体相容性好、组织分布广和无酶活等特性，使其成为非常理想的重组蛋白融合载体。通过构建融合蛋白技术能够增加重组蛋白的分子量从而延长半衰期，有效的提高重组蛋白的稳定性。

目前FLG的基因工程的表达主要是选取FLG单体结构域进行表达或组合表达，以获得具有不同功能的重组FLG。根据表达载体和宿主菌的不同，主要分为原核表达和真核表达。原核表达系统虽成本低廉，但该系统存在容易形成包涵体、获得的蛋白生物学活性较低等缺陷，而利用真核表达系统进行外源表达能够获得较高活性的目的蛋白。

而现有技术中经大肠杆菌表达的人丝聚蛋白，表达产物需要经纯化才能利用，生产成本较高，且原核表达系统存在容易形成包涵体、获得的重组人丝聚蛋白生物学活性较低等缺陷。经毕赤酵母表达的人丝聚蛋白，因表达的上清液中含有有害甲醇成分，并且去除甲醇成本较高，推广使用较难。

发明内容

为了克服天然提纯人丝聚蛋白工艺复杂、成本高、推广应用受到限制的缺点；现有技术中现有原核表达系统存在容易形成包涵体、获得的人丝聚蛋白生物学活性较低等缺陷的技术问题，本发明提供了一种酿酒酵母表达长效重组人丝聚蛋白，一种酿酒酵母信号肽重组质粒，一种酿酒酵母分泌表达载体，一种酿酒酵母营养缺陷型菌株，以及一种酿酒酵母表达长效重组人丝聚蛋白在保湿化妆品中的应用。

本发明采用以下技术方案实现：一种酿酒酵母表达长效重组人丝聚蛋白，该长效重组人丝聚蛋白的核苷酸序列如Seq ID NO.1所示。

作为上一步技术方案的改进，长效重组人丝聚蛋白的核苷酸序列所对应的氨基酸序列如Seq ID NO.2所示。

进一步地，长效重组人丝聚蛋白的氨基酸序列包括丝聚蛋白的氨基酸序列及人血清白蛋白的氨基酸序列；丝聚蛋白的氨基酸序列包括丝聚蛋白核苷酸序列重复单元C端的一个单体结构所对应的氨基酸序列。