[发明专利]超声辅助闪式提取桂花纯露的提取工艺及活性测定方法

权利要求书

1.一种超声辅助闪式提取桂花纯露的提取工艺，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1)：将烘干的桂花放入食盐水浸泡；

步骤2)：将步骤1)得到的泡有桂花的食盐水在闪式提取器上闪式提取；

步骤3)：将步骤2)得到的提取物搅拌均匀后，置于超声波仪中超声；

步骤4)：步骤3)得到的物料静置后放入已灭菌蒸馏装置蒸馏，再添加蒸馏水；以沸腾为标准起点计时，控制蒸馏速率，使用灭菌瓶接取蒸汽冷凝液；

步骤5)：将步骤4)得到的冷凝液放进超净台自然冷却至室温，无菌环境下过滤，得到的纯露密封后冷藏。

2.如权利要求1所述的超声辅助闪式提取桂花纯露的提取工艺，其特征在于，所述步骤2)中闪式提取的设定电压为15V；步骤3)中超声的功率为600W，超声时间不低于30min。

3.一种桂花纯露的抗氧化活性测定，其特征在于，将权利要求1或2所述的超声辅助闪式提取桂花纯露的提取工艺制备的桂花纯露按照二倍稀释法稀释成不同浓度待测；分别进行DPPH自由基清除实验、ABTS自由基清除实验。

4.如权利要求3所述的桂花纯露的抗氧化活性测定，其特征在于，所述的DPPH自由基清除清除实验具体为：将每个样品和0.16mM用无水乙醇稀释的DPPH溶液在96孔板中混合，并在30℃避光放置；在30分钟后，通过使用酶标仪测量它们于517nm处的吸光度；维生素C用作阳性对照，乙醇用作空白对照，每组实验重复三次，结果取平均值，DPPH自由基清除公式如下：

％inhibition＝(1-A₁/A₀)×100％；

其中，A₁为样品和DPPH溶液的吸光度，A₀为无水乙醇和DPPH溶液的吸光度。

5.如权利要求3所述的桂花纯露的抗氧化活性测定，其特征在于，所述的ABTS自由基清除实验具体为：将7.0mmol/L ABTS水溶液与4.90mmol/L过硫酸钾水溶液按照体积比1:1的比例充分混合，将混合液在暗处室温条件下放置过夜反应，得到含有ABTS阳离子自由基的深绿色溶液，用无水乙醇稀释，分光光度计测定的吸光度为0.700±0.020nm时可作为工作液；将每个浓度的样品和工作液体积比1：1依次加入96孔板中，在30℃的黑暗中保存；6min后，用酶标仪在734nm 处测定吸光度，以维生素C为阳性对照，乙醇为空白对照，ABTS自由基清除率按以下公式计算：

％inhibition＝(1-B₁/B₀)×100％

其中，B₁为样品和ABTS工作液的吸光度，B₀为无水乙醇和ABTS工作液的吸光度。

6.一种桂花纯露的体外酪氨酸酶活性抑制实验方法，其特征在于，将权利要求1或2所述的超声辅助闪式提取桂花纯露的提取工艺制备的桂花纯露按照二倍稀释法稀释成不同浓度待测；缓冲溶液PBS的pH为6.8，酪氨酸酶溶液为50U/mL，L-DOPA溶液为5mM；首先向A、B、C、D孔中依次加入PBS；在A、B孔中分别加入样品，然后将酪氨酸酶溶液放入A和C中，反应后，最后把L-DOPA溶液添加到四孔中连续孵育5分钟后，在475nm下测量吸光度，选择曲酸作为阳性对照；体外酪氨酸酶活性抑制率计算公式如下：

其中，A为既有酪氨酸酶溶液、又有样品的吸光度，B为有样品、但无酪氨酸酶溶液的吸光度，C为有酪氨酸酶溶液、无样品的吸光度，D为没有酪氨酸酶溶液或样品的吸光度。