[发明专利]一种快速光谱显微成像装置有效
申请号: | 202110350189.7 | 申请日: | 2021-03-31 |
公开(公告)号: | CN113514944B | 公开(公告)日: | 2023-02-17 |
发明(设计)人: | 颜成钢;吕彬彬;孙垚棋;张继勇;李宗鹏;张勇东 | 申请(专利权)人: | 杭州电子科技大学 |
主分类号: | G02B21/06 | 分类号: | G02B21/06;G02B21/36;G02B21/02;G01J3/28 |
代理公司: | 杭州君度专利代理事务所(特殊普通合伙) 33240 | 代理人: | 朱月芬 |
地址: | 310018 浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 快速 光谱 显微 成像 装置 | ||
1.一种快速光谱显微成像装置的实现方法,其特征在于,快速光谱显微成像装置包括依次设置的宽光谱白光光源(1)、载物台(2)、显微物镜(3)、分光棱镜(4);沿分光棱镜(4)反射光方向设置有第一视场光阑(5.1)、第一4F中继透镜(7.1)和第一灰度相机(11.1);沿分光棱镜(4)出射光方向设置的第二视场光阑(5.2)、第二4F中继透镜(7.2)、闪耀光栅(8)、带通滤波器(9)、第三4F中继透镜(7.3)、微透镜阵列(10)、第四4F中继透镜(7.4)和第二灰度相机(11.2);
第二4F中继透镜(7.2)的两组镜片之间设置有孔径光阑(6);
宽光谱白光光源(1)用于将载物台(2)上的观测物体即样本照亮,显微物镜(3)用于获取载物台(2)上样本的二维图像信息并经过分光棱镜(4)后分为出射光和反射光两束:
反射光以a亮度成像在第一视场光阑(5.1)所在平面,通过第一4F中继透镜(7.1)将第一视场光阑面实像中继至第一灰度相机(11.1)所在平面;
出射光以1-a亮度聚焦在第二视场光阑(5.2)所在平面,通过第二4F中继透镜(7.2)将第二视场光阑面实像中继至闪耀光栅(8)表面,孔径光阑(6)用于控制入射光数值孔径;闪耀光栅(8)会将场景不同光谱波长下的透射光色散到不同角度上,通过带通滤波器(9)将闪耀光栅(8)亮度最高的+1级中待记录的光谱波段单独通过,对其他波段以及其它光栅级上的光线进行屏蔽;此时闪耀光栅(8)色散后的光线经过第三4F中继透镜(7.3)重新汇聚在微透镜阵列(10)所在平面,不同波长的光线在微透镜阵列(10)后方微透镜焦距f距离处聚焦,并且连续光谱延光栅色散方向一字展开,展开的像经过第四4F中继透镜(7.4),重新成像在第二灰度相机(11.2)的传感器阵列上;整个光路系统中,出射光对应的前后光路需要数值孔径匹配,即投射到微透镜阵列(10)上的光与微透镜阵列(10)本身的数值孔径大小相差不超过5%,以免产生图像重叠混淆;
反射光将宽光谱白光光源(1)下生物样本的高分辨率二维空间信息完整的记录在第一灰度相机(11.1)中;
出射光由于微透镜阵列(10)对视场内成像进行了采样分割,因此不同光谱通道的成像会聚焦在不同的像素坐标中,选取子像素中对应位置的像素重新组合即可得到对应光谱信息;
包括如下步骤:
步骤一:宽光谱白光光源(1)将载物台(2)上的观测物体照亮,显微物镜(3)的成像镜头将观测物体的实像成像经过分光棱镜(4)分为两束:
反射光将样本成像在第一视场光阑(5.1)所在平面,经过第一4F中继透镜(7.1)射在第一灰度相机(11.1)并被记录下来;
出射光将样本成像在第二视场光阑(5.2)所在平面,通过第二4F中继透镜(7.2)射在闪耀光栅(8)刻线一侧,孔径光阑(6)用于控制入射光数值孔径,此时,观测物体的实像与闪耀光栅8的刻线面重合;
步骤二:映射在闪耀光栅(8)表面的观测物体的实像发生色散,通过带通滤波器(9)使得光栅+1级中λ1-λ2波段的光单独通过,经过第三4F中继透镜(7.3)重新汇聚到微透镜阵列(10)上;
步骤三:由于映射在闪耀光栅8表面的观测物体的实像存在色散角度,因此不同波长的光重新汇聚在微透镜阵列(10)上的实像存在不同的出射角,并且在微透镜后焦面(12)上沿着一个维度发生色散,微透镜后焦面(12)上的实像经过第四4F中继透镜(7.4)成像在第二灰度相机(11.2)的像素阵列上;
步骤四:微透镜阵列(10)中每一个微透镜对应第二灰度相机(11.2)的像素阵列中的一块子像素(13)区域,并且经过该微透镜的出射光会投射到子像素(13)的中间一行像素上,此时,将子像素(13)中中间一行对应位置的L个像素重新组合,即能够得到载物台(2)上观测物体在该波长下对应的低分辨率单波长光谱图像,这些重新组合的低分辨率单波长光谱图像分别为P1、P2……PL,得到共L张图像,其像素尺寸由第二灰度相机(11.2)视场内完整微透镜阵列个数决定;
第二灰度相机(11.2)视场内完整微透镜阵列个数为M×N,则单波长图像像素尺寸为M×N;
步骤五:将第二灰度相机(11.2)的光谱响应曲线分为L份,使得中间部分的L-2份宽度相同,光谱响应曲线的第1份和第L份宽度与中间部分满足以下条件:设中间部分宽度为Wm,光谱响应曲线的第1份和第L份宽度设为We,We∈(0.5Wm,Wm],此时第二灰度相机(11.2)对应的R、G、B三组光谱响应曲线图分为L份,其求和值再乘以L作为RGB通道赋值权重;三组权重值分别记为AR、AG、AB其中,
步骤六:将重新组合的低分辨率单波长光谱图像Pi的像素矩阵点乘波段i对应的权值得到第i个波段图像Pi对应的RGB三通道权重矩阵
步骤七:将第一灰度相机(11.1)视场范围与第二灰度相机(11.2)能够捕获的完整微透镜阵列范围保持一致,然后将第一灰度相机(11.1)的图像Q设置为第二灰度相机(11.2)的L张照片P1、P2……PL像素尺寸的L×L倍大小,此时第二灰度相机(11.2)能够捕获的完整子像素个数为M×N,这些子像素需要M×N×L×L个像素来记录,第一灰度相机(11.1)中对应的M×N个大小为L×L的子像素分别乘以第i个波段图像Pi对应的RGB三通道权重矩阵得到三个图像将三个图像作为RGB图的三个通道合成一张RGB图像,其像素尺寸为M×N×L×L的图像,并且每个子像素使用相同的RGB三通道权重赋值,作为第i个波段的参考光谱图像Qi。
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