[发明专利]外切酶III驱动的三维DNA纳米机器及其应用

权利要求书

1.一种外切酶III驱动的三维DNA纳米机器在制备半胱天冬酶抑制剂筛选的检测试剂盒中的应用；

所述外切酶III驱动的三维DNA纳米机器，其包括信号探针@纳米金结构和检测探针；信号探针中包含信号探针序列和荧光分子，检测探针中包含半胱天冬酶的识别位点和DNA触发链，DNA触发链与信号探针序列互补；信号探针@纳米金结构由信号探针与纳米金溶液混合得到，信号探针通过Au-S键连接在纳米金上；检测探针可组装在由链霉亲和素包覆的磁珠上构成探针-磁珠结构；

检测探针在半胱天冬酶存在下裂解释放出包含DNA触发链的结构，该结构中的DNA触发链与信号探针杂交形成双链DNA，双链DNA可被外切酶III识别并消化，释放出信号探针中的荧光分子，DNA触发链随即恢复单链并继续与其他信号探针杂交，以此实现外切酶III对纳米金表面信号探针的循环切割，从而循环释放出荧光分子；

所述半胱天冬酶为半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-9；

所述信号探针包括信号探针1和信号探针2，所述检测探针包含检测探针1和检测探针2；

其中，检测探针1中包含半胱天冬酶-8的识别位点Ile-Glu-Thr-Asp和DNA触发链1，检测探针2中包含半胱天冬酶-9的识别位点Leu-Glu-His-Asp和DNA触发链2；

DNA触发链1与信号探针1序列互补，DNA触发链2与信号探针2序列互补；DNA触发链1和DNA触发链2的3’末端包含免于被外切酶III消化的保护序列区；

所述荧光分子为Cy5分子和Texas Red分子，其分别被包含在信号探针1和信号探针2上；

所述检测探针1的结构为：生物素-(COOH)-Lys-Ser-His-Ser-His-Gly-Asp-Thr-Glu-Ile-Cys-(NH2)-TTT TTC ACT TGA GGC TAA CAC TTT TT，其中，多肽部分蛋白质序列为(氨基端至羧基端)：Cys-Ile-Glu-Thr-Asp-Gly-His-Ser-His-Ser-Lys-生物素（SEQ ID No.1），DNA部分核酸序列为（5’-3’）：TTT TTC ACT TGA GGC TAA CAC TTT TT（SEQ ID No. 2）；检测探针2的结构为：生物素-(COOH)-Lys-Arg-Gly-Arg-Gly-Gly-Asp-His-Glu-Leu-Cys-(NH2)-TTT TTC ACA ATC GGA CTA TCG TTT TT，其中，多肽部分蛋白质序列为(氨基端至羧基端)：Cys-Leu-Glu-His-Asp-Gly-Gly-Arg-Gly-Arg-Lys-生物素（SEQ ID No. 3），DNA部分核酸序列为（5’-3’）：TTT TTC ACA ATC GGA CTA TCG TTT TT（SEQ ID No. 4）；

所述信号探针1的序列为（5’-3’）：SH-TTT TTT TTT TGT GTT AGC CTC AAG TG-Cy5（SEQ ID No. 9）；信号探针2的序列为（5’-3’）：SH-TTT TTT TTT TCG ATA GTC CGA TTGTG-Texas Red（SEQ ID No. 10）。