[发明专利]hsa_circ_0000231在治疗舌鳞状细胞癌方面的应用

说明书

本发明属于生物医疗技术领域，本发明公开了一种舌鳞状细胞癌的临床诊断标志物，其特征在于，所述诊断标志物为hsa_circ_0000231。本发明还公开了敲低hsa_circ_0000231表达在治疗舌鳞状细胞癌方面的应用。本发明另外还公开小干扰RNA在制备治疗舌鳞状细胞癌药物方面的应用，其特征在于，所述小干扰RNA靶向hsa_circ_0000231连接区，靶点序列为5'‑CTGAACAGATAA GGGTTTAAA‑3'。一种用于检测舌鳞状细胞癌的试剂盒，其特征在于，包括用于提取总RNA的Trizol试剂、逆转录试剂、hsa_circ_0000231上游引物、hsa_circ_0000231上游引物、GAPDH上游引物序列、GAPDH下游引物。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及hsa_circ_0000231表达在治疗舌鳞状细胞癌方面的应用，具体涉及一种舌鳞状细胞癌的临床诊断标志物、敲低hsa_circ_0000231表达在治疗舌鳞状细胞癌方面的应用、小干扰RNA在制备治疗舌鳞状细胞癌药物方面的应用、一种用于检测舌鳞状细胞癌的试剂盒及其使用方法。

背景技术

舌癌是最常见的口腔癌，男性多于女性。舌癌多数为鳞癌，多发生于舌缘，其次为舌尖、舌背及舌根等处，常为溃疡型或浸润型。一般恶性程度较高，生长快，浸润性较强，常波及舌肌，致使舌运动受限，使说话、进食及吞咽均发生困难。肿瘤的发生发展是多基因参与、多步骤、多阶段的复杂过程。环状RNA(circRNA)是一类广泛存在于哺乳动物体内的非编码转录调节物，其高度保守，大多数可以在转录或转录后水平发挥调控作用。

目前，microRNA和lncRNA与TSCC的相关性研究较多，而circRNA尚未见报道。我们在前期研究中，通过第二代高通量测序技术对配对新鲜TSCC组织样本进行circRNA检测和鉴定，使用circBase数据库和circ2Trait疾病数据库对所鉴定的circRNA进行注释并将测序结果上传至GEO公共数据库(High-throughput sequencing data are accessibleusing GEO ID:GSE118750)。以倍数变化(FC)≥2.0，P-value0.05作为差异circRNA的阈值筛选出322个差异表达的circRNA。对上述circRNA的宿主基因进行GO功能及KEGG通路分析，选定hsa_circ_0000231作为研究对象。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在问题或不足，本发明提供一种舌鳞状细胞癌的临床诊断标志物、敲低hsa_circ_0000231表达在治疗舌鳞状细胞癌方面的应用、小干扰RNA在制备治疗舌鳞状细胞癌药物方面的应用、一种用于检测舌鳞状细胞癌的试剂盒及其使用方法。

为实现上述发明目的，本发明的实施例提供一种舌鳞状细胞癌的临床诊断标志物，其特征在于，所述诊断标志物为hsa_circ_0000231。

进一步的，所述hsa_circ_0000231通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进舌鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

本发明的实施例还提供敲低hsa_circ_0000231表达在治疗舌鳞状细胞癌方面的应用。

具体的，敲低hsa_circ_0000231表达在治疗舌鳞状细胞癌方面的应用，其特征在于，包括以下步骤：(1)构建hsa_circ_0000231基因干扰，慢病毒转染，实现TSCC细胞系CAL-27和Tca-8113中hsa_circ_0000231的敲低；(2)qRT-PCR检测hsa_circ_0000231干扰组和对照组细胞中hsa_circ_0000231表达；(3)选择敲低效率最高的细胞进行CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell侵袭实验和划痕实验，Western blot法检测干扰组和对照组TSCC细胞中EMT相关蛋白E-钙粘蛋白、Snail蛋白、N-钙粘蛋白波形蛋白表达，比较干扰组和对照组TSCC细胞的增殖、侵袭和转移能力。