[发明专利]一种细胞膜成孔蛋白LjGSDM及其表达与应用有效
| 申请号： | 202110345300.3 | 申请日： | 2021-03-31 |
| 公开（公告）号： | CN113121667B | 公开（公告）日： | 2022-04-01 |
| 发明（设计）人： | 元少春;徐安龙;鲁琰;王欣丽;韦旭侠;陈尚武 | 申请（专利权）人： | 中山大学 |
| 主分类号： | C07K14/46 | 分类号： | C07K14/46;C12N15/12;C12N15/85;C12N5/10;A61K38/17;A61P31/04 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 颜希文 |
| 地址： | 510275 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 细胞膜 蛋白 ljgsdm 及其 表达 应用 | ||
1.一种LjGSDM蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.一种LjGSDM基因，其特征在于，编码权利要求1所述的LjGSDM蛋白。
3.如权利要求2所述的LjGSDM基因，其特征在于，其碱基序列如SEQ ID NO:2所示。
4.包含权利要求2或3所述LjGSDM基因的重组载体。
5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，所述载体为真核表达载体。
6.包含权利要求2或3所述LjGSDM基因的重组细胞。
7.如权利要求6所述的重组细胞，其特征在于，所述细胞为HEK293T细胞。
8.一种表达LjGSDM蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)用权利要求4或5所述的重组载体转化适于其表达的细胞，获得重组细胞；
(2)将重组细胞进行培养后，裂解细胞回收并纯化得到所表达的LjGSDM蛋白。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)将权利要求2或3所述的LjGSDM基因克隆到真核表达载体pFXB-5’Flag，得到表达载体pFXB-LjGSDM；
(2)将pFXB-LjGSDM转化HEK293T细胞，转染后将转染了目的基因的293T细胞传入细胞培养皿；
(3)细胞在细胞培养皿中生长20-30h后，去除细胞培养基，再向细胞培养皿中加入含有蛋白酶抑制剂的IP裂解液对细胞进行裂解；
(4)将细胞裂解液转入离心管，离心后取上清液，加入M2 AffinityGel、4℃旋转过夜；
(5)次日将结合了目的蛋白的Affinity Gel离心去上清，并用IP裂解液洗涤；
(6)向洗涤后的Affinity Gel中加入IP裂解液和3×FLAG peptide竞争1h后，离心收集上清蛋白溶液。
10.权利要求1所述LjGSDM蛋白在制备杀菌产品或治疗感染性疾病药物中的应用。
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