[发明专利]一种检测MPL基因W515L、W515S和W515A突变的引物探针及其应用

权利要求书

1.一种检测MPL基因W515L、W515S和W515A突变的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物包括针对MPL基因W515L、W515S和W515A突变的PCR上游引物、PCR下游引物和探针；

所述PCR下游引物的3’端末1位碱基与MPL基因W515L、W515S和W515A突变位点互补；

所述PCR下游引物的3’端末2位碱基为错配碱基。

2.根据权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，所述PCR下游引物的3’端末1位碱基为简并碱基R。

3.根据权利要求1或2所述的引物探针组合物，其特征在于，所述探针的5’端修饰有荧光基团，3’端修饰有淬灭基团；

优选地，所述荧光基团包括FAM、VIC、HEX、Cy3或Cy5中的任意一种；

优选地，所述淬灭基团包括BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3、MGB或TAMRA中的任意一种。

4.根据权利要求1-3任一项所述的引物探针组合物，其特征在于，所述PCR上游引物包括SEQ ID NO:1所示的核酸序列；

优选地，所述PCR下游引物包括SEQ ID NO:2所示的核酸序列；

优选地，所述探针包括SEQ ID NO:3所示的核酸序列。

5.一种检测MPL基因W515L、W515S和W515A突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-4任一项所述的引物探针组合物；

优选地，所述试剂盒还包括DNA聚合酶、UDG酶、dNTP或dUTP中的任意一种或至少两种的组合。

6.一种检测MPL基因W515L、W515S和W515A突变的体系，其特征在于，所述体系包括权利要求1-4任一项所述的引物探针组合物；

优选地，所述体系还包括DNA聚合酶、UDG酶、dNTP或dUTP中的任意一种或至少两种的组合。

7.根据权利要求6所述的体系，其特征在于，所述引物探针组合物中的PCR上游引物在所述体系中的终浓度为200～1000nM；

优选地，所述引物探针组合物中的PCR下游引物在所述体系中的终浓度为200～1000nM；

优选地，所述引物探针组合物中的探针在所述体系中的终浓度为100～500nM；

优选地，所述DNA聚合酶在所述体系中的终浓度为0.1～0.5U/μL；

优选地，所述UDG酶在所述体系中的终浓度为0.01～0.05U/μL；

优选地，所述dNTP在所述体系中的终浓度为100～400μM；

优选地，所述dUTP在所述体系中的终浓度为200～600μM。

8.一种检测MPL基因W515L、W515S和W515A突变的方法，其特征在于，所述方法包括：

将待测DNA加入权利要求6或7所述的体系中，40～60℃预处理1～5min；92～98℃预变性1～5min；92～98℃变性10～30s，55～65℃退火延伸0.5～2min，40～50个循环。

9.一种检测MPL基因W515L、W515S和W515A突变的装置，其特征在于，所述装置包括：

体系配制单元：用于配制权利要求6或7所述的体系；

检测单元：用于将待测DNA加入配制的体系中，40～60℃预处理1～5min；92～98℃预变性1～5min；92～98℃变性10～30s，55～65℃退火延伸0.5～2min，40～50个循环。

10.权利要求1-4任一项所述的引物探针组合物、权利要求5所述的试剂盒、权利要求6或7所述的体系或权利要求9所述的装置在制备MPL基因突变检测产品中的应用。