[发明专利]一种酶法制备医药中间体的酶残留检测方法

权利要求书

1.一种酶法制备医药中间体的酶残留检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)配制两种工作液

配置A、B两种工作液，工作液A：1.4g BCA二钠盐，2.8g无水碳酸钠，0.224g酒石酸钠，0.56g氢氧化钠，1.33g碳酸氢钠定容至100mL；工作液B：0.56g硫酸铜加水定容至100mL；将工作液A与工作液B以50：1充分混匀获得工作液C；

(2)配制标准曲线溶液

取标准蛋白储备溶液BSA溶液，经过梯度稀释获得制备标准曲线的标准蛋白稀释液，将该稀释液与工作液C混匀，并添加一定体积的助溶剂混匀保温反应后，即可得标准曲线溶液；

(3)制备供试品测定溶液

将一定量的医药中间供试品溶解于助溶剂中，与等体积工作液C混匀后，纯水补齐与制备标准曲线溶液体积等同后，进行保温反应，作为供试品测定溶液；

(4)制备空白溶液

取与上述标准曲线溶液等体积的工作液C、助溶剂混匀后，纯水补齐与制备标准曲线溶液体积等同后，进行保温反应，作为空白溶液对照；

(5)计算酶蛋白残留量

使用酶标仪作为检测仪器，选用562nm作为检测波长，通过空白溶液扣除本底，采用标准曲线溶液测定吸光度值，同时添加供试品测定溶液，在同等条件下测定吸光度值，根据标准曲线溶液吸光度值自动生成标准曲线，同时计算出供试品中的酶蛋白残留量。

2.根据权利要求1所述的酶法制备医药中间体的酶残留检测方法，其特征在于：所述助溶剂在测定溶液占总体积比为10％～70％。

3.根据权利要求1所述的酶法制备医药中间体的酶残留检测方法，其特征在于：每220μl测定溶液中的所述医药中间体供试品的添加量为1～100mg。

4.根据权利要求1所述的酶法制备医药中间体的酶残留检测方法，其特征在于：所述助溶剂为甲醇。

5.根据权利要求1所述的酶法制备医药中间体的酶残留检测方法，其特征在于：所述保温反应时间为20～40min，保温温度为30～50℃。