[发明专利]蓝莓枝条外植体的处理方法及组培工艺

说明书

本发明涉及一种蓝莓枝条外植体的处理方法及组培工艺。本申请创造性的先用微冻技术处理蓝莓枝条，取微冻后的蓝莓枝条的嫩芽为外植体进行蓝莓组培，研究结果显示，微冻处理组的蓝莓组培苗，萌芽率、生根能力和成活率都好于未经微冻处理的，本申请为蓝莓组培方法的改进提供新的方向。

技术领域

本发明涉及蓝莓培育领域，具体涉及蓝莓外植体的处理方法及组培工艺。

背景技术

蓝莓(Blueberry)为杜鹃花科(Ericaceae)越桔属(Vaccinium)多年生落叶或常绿灌木或小灌木,果实为蓝色浆果，富含花青素、黄酮等多种生理活性成分，能有效防止脑神经衰老，糖尿病等疾病的发生，增强心脏功能，有极好的抗癌功效。随着蓝莓需求量的不断提升，对蓝莓苗木的需求量也逐年增加，但是我国人工栽培蓝莓起步较晚，如何扩大蓝莓栽培面积，成为亟待解决的重要问题。

嫁接和组培是目前蓝莓的两种主要繁殖方法，相对于嫁接，组培法具有可以得到无病毒苗木、繁殖速度快、在短期内可获得大量繁殖体、在阶段发育上比常规发育成苗更加年轻等优点，因而组培技术在蓝莓种苗繁育中应用地越来越广。但是蓝莓组织培养时容易出现试管苗生根困难、生根率低等问题。

微冻技术是应用超低温技术，在微冻液的介导下，将果蔬、肉类等产品直接冻结但产品的细胞膜未被冻裂，处于生物体微冻状态，从而保持了被冻产品的鲜活品质。发明人将微冻技术创造性的应用到农作物育种中，通过微冻生物科技解决农作物育种中存在的问题，在专利CN202110073639.2一种农作物种子微冻方法及其应用中，发明人发现微冻处理后的水稻种子出芽和生长较好。

本申请创造性的先用微冻技术处理蓝莓枝条，取微冻后的蓝莓枝条的嫩芽为外植体进行蓝莓组培，研究结果显示，微冻处理组的蓝莓组培苗，萌芽率、生根能力和成活率都好于未经微冻处理的，本申请为蓝莓组培方法的改进提供新的方向。

发明内容

本发明披露一种蓝莓外植体的处理方法，具体步骤为：

1)选取蓝莓组培材料：选取处于休眠期的营养枝条；

2)微冻处理：在-26℃～-30℃的温度下微冻处理1-3分钟，取出后在-16℃～-20℃的冷库内冷冻一周，然后阶梯式升温至常温；

3)获取蓝莓外植体：将微冻处理后的蓝莓枝条插在水中，22-25℃左右进行培养，取新抽出的嫩枝为外植体。

进一步，所述微冻处理为在-28℃进行微冻处理2分钟；

进一步，取出后在-18℃的冷库内冷冻一周，然后阶梯式升温至常温。

所述阶梯式升温可以是每次升温1～8℃，每次升温数十分钟(10-60min)，直至常温。

所述阶梯式升温可以是每次升温5℃，每次升温20分钟，直至常温。

例如，每次升温1～8℃，每次升温数十分钟(10-60min)，直至常温或室温，例如-18℃～-16℃解冻20min，-16℃～-14℃20min，-14℃～-12℃20min，-12℃～-10℃20min，-10℃～-8℃20min，-8℃～-6℃20min，-6℃～-4℃20min，-4℃～-2℃20min，-2℃～0℃20min，0℃～4℃20min，4℃～8℃20min，8℃～12℃20min，12℃～16℃20min；

又例如-18℃～-15℃解冻15min，-15℃～-12℃15min，-12℃～-9℃15min，-9℃～-6℃15min，-6℃～-3℃15min，-3℃～0℃15min，0℃～3℃15min，3℃～6℃15min，6℃～9℃15min，9℃～12℃15min。

上述方案仅是对阶梯式升温的描述，可以对解冻温度间隔和解冻时间进行适当调整。