[发明专利]一种利用微冻生物科技培育蓝莓优品的工艺

说明书

本发明涉及一种利用微冻生物科技培育蓝莓优品的工艺。为解决现有蓝莓组织培养中试管苗生根困难、成活率低等问题，本申请创造性的将微冻技术结合蓝莓的组培，在蓝莓组培前对蓝莓外植体进行微冻处理，采用本申请提供的体系和工艺进行蓝莓组培，具有生根速度快、发根数目多、生根率高的特点，解决了蓝莓生产过程中发根难、所需时间长等制约蓝莓产业化发展的问题。

技术领域

本发明涉及蓝莓培育领域，具体涉及一种利用微冻生物科技培育蓝莓优品的工艺。

背景技术

蓝莓(Blueberry)为杜鹃花科(Ericaceae)越桔属(Vaccinium)多年生落叶或常绿灌木或小灌木,果实为蓝色浆果，富含花青素、黄酮等多种生理活性成分，具有较高的药用价值和保健作用。嫁接和组培是蓝莓的两种主要繁殖方法，相对于嫁接，组培法具有可以得到无病毒苗木、繁殖速度快、不受季节限制、在短期内可获得大量繁殖体、在阶段发育上比常规发育成苗更加年轻等优点，因而组培技术在蓝莓种苗繁育中应用地越来越广。但是蓝莓组织培养时容易出现试管苗生根困难、生根率低等问题。

微冻技术是应用超低温技术，在微冻液的介导下，将果蔬、肉类等产品直接冻结但产品的细胞膜未被冻裂，处于生物体微冻状态，从而保持了被冻产品的鲜活品质。发明人将微冻技术创造性的应用到农作物育种中，通过微冻生物科技解决农作物育种中存在的问题，在专利CN202110073639.2一种农作物种子微冻方法及其应用中，发明人发现微冻处理后的水稻种子出芽和生长较好。

为解决现有蓝莓组织培养中试管苗生根困难、生根率低、成活率低等问题，本申请创造性的将微冻技术结合蓝莓的组培，在蓝莓组培前对蓝莓外植体进行微冻处理，不仅增强外植体后续组培时的生根能力和增殖能力，还提高外植体的抗病毒特性。

发明内容

本发明披露一种蓝莓外植体的处理方法，具体步骤为：

1)选取蓝莓外植体：取健壮的蓝莓嫩枝或半木质化新梢；

2)微冻处理：在-6～-2℃进行微冻处理30～40分钟；

3)逐渐解冻：每间隔15-30分钟升温1-5℃。

进一步，所述微冻处理为在-4℃进行微冻处理30-40分钟。

进一步，逐渐解冻：每间隔20分钟升温2℃，至常温。

本申请中的常温可以是室外温度或者10-30℃，优选的，常温为15-25℃。

蓝莓外植体还可以为带叶柄或不带叶柄的叶片、当年生绿枝茎段。

本申请中蓝莓外植体可以是健壮的蓝莓嫩枝、半木质化新梢、蓝莓茎段或茎尖、当年生绿枝茎段、带叶柄的叶片、不带叶柄的叶片等。

一种蓝莓外植体，所述外植体是采用上述方法处理得到的外植体。

一种蓝莓组培苗的培养方法，包括上述蓝莓外植体的处理方法。

进一步，所述培养方法还包括：

外植体消毒：将微冻处理后的外植体剪成茎段并洗净后消毒；

诱导培养：接种于诱导培养基中进行诱导分化，得到蓝莓初代组培苗；

生根培养：接种到生根培养基中进行生根培养，得到生根试管苗。

本申请中外植体消毒包括外植体的灭菌，可采用乙醇、升汞、次录酸钠、双氧水等方式进行消毒，消毒之前可用洗衣粉液等浸泡外植体后流水冲洗数分钟。用乙醇对外植体消毒一般采用70-75％的使用浓度，时间为30s-10min；升汞的使用浓度一般采用0.1％，时间为5-10min。外植体消毒也可以是上述几种方式中的两种或多种的组合，例如乙醇和升汞的组合，具体如：先用70％酒精消毒1-2min， 0.1％升汞灭菌6-10min，无菌水冲洗数次。所述数次可以是1-10次不等。