[发明专利]一种用于食品保鲜的杂合肽及其在酿酒酵母表达系统的基因表达方法

权利要求书

1.一种用于食品保鲜的杂合肽，该杂合肽包含33个氨基酸，其氨基酸序列如SEQ.No.1所示，编码该杂合肽的核苷酸序列如SEQ：No.2所示。

2.一种权利要求1所述杂合肽在酿酒酵母表达系统的基因表达方法，其具体包括如下步骤：

1)人工合成编码杂合肽的基因序列，将基因进行PCR扩增后使用连接酶将其连入重组酵母表达载体pYES2-ɑ中，构建表达重组质粒pYES2-ɑ-SS-33；

2)将构建的表达重组质粒pYES2-ɑ-SS-33电转化宿主酿酒酵母INVSc1，使用氨苄青霉素的YPDS选择平板筛选得到能表达杂合肽的重组基因工程酵母菌；

3)将筛选得到的重组基因工程酵母菌进行高密度发酵得到含有杂合肽的发酵液，冷冻离心即可得到含有杂合肽的上清液。

3.根据权利要求2所述的杂合肽在酿酒酵母表达系统的基因表达方法，其特征在于，所述步骤1)包括如下步骤：使用限制性内切酶Xho I和EcoR I将表达载体pYES2-ɑ进行酶切，通过T4连接酶将目的基因与酶切后的pYES2-ɑ进行连接得到重组载体pYES2-ɑ-SS-33，PCR鉴定后进行胶回收，即可得到纯化后的重组载体pYES2-ɑ-SS-33。

4.根据权利要求2所述的杂合肽在酿酒酵母表达系统的基因表达方法，其特征在于，所述步骤2)包括如下步骤：制备酿酒酵母感受态细胞悬液，使用电转化的方法将重组载体pYES2-ɑ-SS-33加入酿酒酵母感受态细胞悬液中，使用氨苄青霉素的YPDS选择平板筛选阳性转化子。

5.根据权利要求2所述的杂合肽在酿酒酵母表达系统的基因表达方法，其特征在于，所述步骤3)具体包括如下步骤：将筛选到的重组基因工程酵母菌接种于5ml SC-U诱导培养基中，28℃，200rpm培养24h后将菌液直接转接于250ml SC-U液体诱导培养基中，28℃震荡培养，每隔24h补加10％半乳糖溶液至终浓度达1％；培养120h后，在4℃12000rpm的离心条件下离心10min，收集上清液即可得到含有杂合肽的上清液。

6.权利要求1所述的杂合肽在食品保鲜中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的杂合肽通过浸泡法用于新鲜猪肉保鲜。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的杂合肽用于鲜牛奶保鲜。