[发明专利]一种单链DNA接头及其制备和应用

权利要求书

1.一种单链DNA接头，其特征在于，所述单链DNA接头包括一对完全互补的引物，所述引物的末端连接有简并碱基N，所述简并碱基N的数量为6～7个；所述单链DNA接头序列如SEQID NO.1～2所示；或如SEQ ID NO.3～4所示；或如SEQ ID NO.5～6所示。

2.如权利要求1所述的单链DNA接头，其特征在于，所述引物中的一条链的3’末端连接有简并碱基N，所述简并碱基中的最后一个碱基使用C3 Spacer修饰；所述引物中的另外一条链的3’末端和5’末端进行磷酸化修饰。

3.如权利要求1所述的单链DNA接头，其特征在于，所述引物中的一条链的5’末端连接有简并碱基N且3’末端使用C3 Spacer修饰，所述引物中的另外一条链的3’末端和5’末端不进行修饰。

4.一种单链DNA接头的制备方法，其特征在于，将权利要求1～3任一项所述两条互补的单链混合，经变性、降温和保温步骤后，即可制得。

5.如权利要求4所述的单链DNA接头的制备方法，其特征在于，将两条所述单链按摩尔浓度比为1:1进行混合，使混合后的引物浓度在20～100 μM之间；将混合液经85℃变性5min，然后以-0.1℃/s的速度缓慢降温到45℃，在45℃继续保温5 min后，即可制得所述单链DNA接头。

6.一种单链DNA接头的应用，其特征在于，将包括权利要求1～3任一项所述的单链DNA接头的接头Mix与单链DNA，在冰上等体积混合，然后在37℃水浴中孵育15～20 min，即可得到连接产物。

7.如权利要求6所述的单链DNA接头的应用，其特征在于，所述接头Mix包括如下组分：10-20 pmol单链DNA接头、20-40 U的T4 DNA Ligase、1×T4 DNA Ligase Buffer。