[发明专利]一种siRNA和抗癌药靶向共递送系统及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种siRNA和抗癌药靶向共递送系统及其制备方法，其采用肿瘤靶向穿膜肽iRGD对NPs进行靶向修饰，再负载化疗药物盐酸阿霉素、血管内皮生长因子的siRNA，构建肿瘤治疗体系DOX/siVEGF/iRGD‑NPs，该体系具有较低的细胞毒性，通过DOX、siVEGF、iRGD和NPs四者协同作用获得主动靶向抑制肿瘤细胞MCF‑7、新生血管及靶向穿透肿瘤球的能力，预计在肿瘤的靶向治疗上具有潜在应用前景。

技术领域

本发明属于肿瘤细胞靶向抑制技术领域，具体涉及一种siRNA和抗癌药靶向共递送系统及其制备方法和应用。

背景技术

肿瘤因其较高的发病率及致死率成为世界三大疾病之一，严重威胁着人类的生命健康。近年来，联合化学治疗与基因治疗用于肿瘤治疗成为了国内外的研究热点。化学治疗作为肿瘤治疗最主要的方法之一，可用于治疗多种类型的肿瘤，但由于安全剂量范围内的药物并不能完全根除肿瘤，过量非特异选择性的药物在体内累积，引起严重的毒副作用。治疗基因的加入可以减少化疗药物的剂量，从而降低药物引起的毒副作用，同时避免肿瘤细胞产生耐药性，而化疗药物的使用可以有效提高基因在细胞中的表达，增强治疗基因的治疗效果。

因此，联合化学治疗与基因治疗可以达到降低毒副作用，提高肿瘤治疗效果的目的。但联合化学治疗与基因治疗面临一个巨大的挑战，即合成安全高效且特异性强的纳米载体。聚合物形成的纳米囊泡因其独特的结构及理化性质，得到广泛的使用。通过在纳米载体表面进行靶向修饰的主动靶向作用，使其能特异性靶向至肿瘤部位，提高肿瘤细胞对纳米载体的摄取。相比于正常组织，肿瘤组织通常会过度表达某些受体或抗原，而纳米载体表面的靶向配体通过与肿瘤组织表面的受体/抗原特异性结合，实现靶向递送。

发明内容

本发明的目的在于提供一种siRNA和抗癌药靶向共递送系统的制备方法，该方法工艺简单、易于控制。

本发明的目的还在于提供采用上述制备方法制备的siRNA和抗癌药靶向共递送系统。

本发明的最后一个目的在于提供上述siRNA和抗癌药靶向共递送系统在制备具有肿瘤细胞靶向抑制能力、靶向穿透能力和体内抑制血管生成能力功效的药物中的应用。

为了实现上述第一个目的，本发明采用如下技术方案：一种siRNA和抗癌药靶向共递送系统的制备方法，包括以下步骤：

(1)脂多糖胺纳米囊泡(NPs)的制备

通过酰胺化反应将胆固醇氯甲酸酯(cholesteryl，Cho)引入聚乙烯亚胺(PEI)，得到胆固醇封端的聚乙烯亚胺(PEI-Cho)；

通过高碘酸钠氧化反应制备得到多醛基氧化海藻酸钠(Oxidized alginate,OA)；

通过Schiff碱反应将多醛基氧化海藻酸钠(MASA)引入胆固醇封端的聚乙烯亚胺(PEI-Cho)，并通过还原化合物中的亚胺键和醛基得到脂多糖胺(lipopolysaccharide-amine，LPSA)纳米囊泡(NPs)；

(2)纳米囊泡包裹盐酸阿霉素(DOX/NPs)的制备

配制盐酸阿霉素(DOX)/PBS溶液，随后加入步骤(1)中制备的脂多糖胺纳米囊泡(NPs)，在磁力搅拌下先进行超声处理，再继续搅拌反应，反应结束后离心，制得纳米囊泡包裹盐酸阿霉素(DOX/NPs)溶液；

(3)siRNA/DOX-NPs的制备

将FAM-siRNA粉末溶于无核酶水制成FAM-siRNA溶液，与纳米囊泡包裹盐酸阿霉素(DOX/NPs)溶液混合，室温下静置后，离心，除去未被包裹的FAM-siRNA，获得siRNA/DOX-NPs；

(4)DOX/siRNA/iRGD-NPs的制备