[发明专利]一种转肽酶生化检验试剂底物的制备方法

说明书

本发明涉及一种转肽酶生化检验试剂底物的制备方法，属于化学合成的技术领域，制备方法以5‑氨基‑2‑硝基苯甲酸与化合物A邻苯二甲酰‑L‑谷氨酸酐为起始原料，具体包括以下步骤：步骤(1)：5‑氨基‑2‑硝基苯甲酸与化合物A邻苯二甲酰‑L‑谷氨酸酐在酸性溶剂中反应合成中间体B；步骤(2)：在溶剂中，将所述中间体B和水合肼进行如下所示的反应，在离子交换树脂作用下铵根化得到化合物Glupa‑C，本发明的制备方法对γ‑谷氨酰‑3‑羧基‑4‑硝基苯胺单铵盐的制备工艺、反应条件和方法进行了改进和优化，使得产品的产率和纯度得到大幅度提高，且制备工艺简便安全，易于放大，适合于工业生产。

技术领域

本发明涉及的是化学合成的技术领域，尤其涉及的是一种转肽酶生化检验试剂底物的制备方法。

背景技术

γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺单铵盐(Glupa-C)是测定转肽酶的良好底物，临床检验中已有重要的使用价值。美国专利US3979447A公开了该化合物的制备方法，以5-氨基-2-硝基苯甲酸与邻苯二甲酰-L-谷氨酸酐(化合物A)在三正丁胺存在下缩合，缩合物再进行肼解得产品。但是该专利没有报道详细的缩合及肼解条件，肼解后产品Glupa-C与邻苯二甲酰肼的分离方法困难，产品Glupa-C的精制方法、质量标准均未见报道，另外三正丁胺属于剧毒品，不适合于工业放大；在重复制备该文献的制备过程实验中，发现没有要的产物，技术路线如下式一：

中国专利CN1076688A公开了5-氨基-2-硝基苯甲酸与邻苯二甲酰-L-谷氨酸酐的合成路线，以及两种原料在温度为140℃～142℃缩合，然后在温度为40℃～50℃肼解。该方法硝基化合物140℃～142℃缩合容易发生爆炸，无法实现工业化生产，另外该合成方法得到的产品的Glupa-C的自由碱的形式，不是单铵盐。技术路线如下式二：

基于上述γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺单铵盐在碱性环境下的制备方法中存在剧毒品原料、工艺有爆炸风险、收率非常低、且无法放大等缺陷，本申请提供一种转肽酶生化检验试剂底物的制备方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种转肽酶生化检验试剂底物的制备方法，以解决现有方法总收率较低的技术问题。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种转肽酶生化检验试剂底物的制备方法，该制备方法以5-氨基-2-硝基苯甲酸与化合物A邻苯二甲酰-L-谷氨酸酐为起始原料，具体包括以下步骤：

步骤(1)：5-氨基-2-硝基苯甲酸与化合物A邻苯二甲酰-L-谷氨酸酐在酸性溶剂中反应合成中间体B；

步骤(2)：在溶剂中，将所述中间体B和水合肼进行反应，在离子交换树脂作用下铵根化得到化合物Glupa-C；

步骤(1)至步骤(2)反应通式如下：

作为对上述发明的进一步改进，所述步骤(1)中酸性溶剂为甲酸或乙酸，溶剂的用量与化合物A邻苯二甲酰-L-谷氨酸酐的体积质量比为1.0mL/g～10mL/g，优选为4.6mL/g。

作为对上述发明的进一步改进，所述步骤(1)中5-氨基-2-硝基苯甲酸和化合物A邻苯二甲酰-L-谷氨酸酐的摩尔比为0.5:1～1:3，优选为0.5:1-1:1.5，更优选为0.9:1。

作为对上述发明的进一步改进，所述步骤(1)中反应温度为20℃～200℃，优选为100℃。

作为对上述发明的进一步改进，所述步骤(1)中反应进程采用TLC、HPLC或NMR进行检测，以化合物A邻苯二甲酰-L-谷氨酸酐消失时为反应终点，反应时间为0.1～15小时，优选为2小时。