[发明专利]石斛夜光丸中人参成分真伪的检测方法

权利要求书

1.一种石斛夜光丸中人参成分真伪的检测方法，其特征在于，所述方法是采用高效液相色谱法检测待测样品中拟人参皂苷F₁₁的含量，具体步骤如下：

（1）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱；洗脱程序为：0～20min，10%→30%A，20～45min，30%A；流速为1.0mL/min；用高温型蒸发光散射检测器检测，理论板数按拟人参皂苷F₁₁峰计算应不低于3000；

（2）对照品溶液制备：取拟人参皂苷F₁₁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含100μg拟人参皂苷F₁₁的溶液，即得对照品溶液；

（3）供试品溶液的制备：取石斛夜光丸水蜜丸，研碎，取约6g；或取石斛夜光丸小蜜丸或大蜜丸，剪碎，取约9g；精密称定，置具塞锥形瓶中，加入体积浓度为70%的甲醇溶液100mL，密塞，称定重量，加热回流1h，取出，放冷，再称定重量，用体积浓度为70%的甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液50mL，蒸干，残渣加水25mL使溶解，用水饱和的正丁醇溶液振摇提取4次，每次25mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次50mL，再用水饱和的正丁醇溶液50mL洗涤，分取正丁醇液，减压浓缩，回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至2mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（4）测定：分别精密吸取对照品溶液5μL、20μL，供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算拟人参皂苷F₁₁的含量；

（5）结果判断：石斛夜光丸中含拟人参皂苷F₁₁，水蜜丸每1g不得过40μg，小蜜丸每1g不得过27μg，大蜜丸每丸不得过151μg。

2.一种石斛夜光丸中人参成分真伪的检测方法，其特征在于，所述方法是采用高效液相色谱-质谱法进行检测，具体步骤如下：

（1）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱；以0.1%甲酸溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；洗脱程序为：0～6min，90%A，6～20min，90%→50%A，20～21min，50%→10%A，21～26min，10%A，26～27min，10%→90%A，27～30min，90%A；流速为0.25mL/min；用高温型蒸发光散射检测器检测，理论板数按拟人参皂苷F₁₁峰计算应不低于3000；

（2）质谱条件：电喷雾离子源；ESI^-，多反应监测；选择m/z845.5→653.4和m/z845.5→490.9作为检测离子对；当拟人参皂苷F₁₁对照品溶液进样为1μL时，2对检测离子对的MRM色谱峰的信噪比均应大于3:1；

（3）对照品溶液制备：取拟人参皂苷F₁₁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含1μg拟人参皂苷F₁₁的溶液，即得对照品溶液；

（4）供试品溶液的制备：取石斛夜光丸水蜜丸，研碎，取约6g；或取石斛夜光丸小蜜丸或大蜜丸，剪碎，取约9g；精密称定，置具塞锥形瓶中，加入体积浓度为70%的甲醇溶液100mL，密塞，称定重量，加热回流1h，取出，放冷，再称定重量，用体积浓度为70%的甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液50mL，蒸干，残渣加水25mL使溶解，用水饱和的正丁醇溶液振摇提取4次，每次25mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次50mL，再用水饱和的正丁醇溶液50mL洗涤，分取正丁醇液，减压浓缩，回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至2mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液100μL，置1mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得；

（5）测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1μL，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定，即得；

（6）结果判断：当供试品溶液检出色谱峰的保留时间与拟人参皂苷F₁₁对照品一致，并且所选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度对照品溶液的离子相对丰度比一致，相对偏差不超过以下规定的范围：k＞50，最大允许偏差为±20%，20＜k≤50，最大允许偏差为±25%，10＜k≤20，最大允许偏差为±30%，k≤10，最大允许偏差为±50%；则可判定石斛夜光丸样品中存在拟人参皂苷F₁₁。