[发明专利]一种用于修复宫腔粘连的生物组合物及其制备方法

说明书

一种用于修复宫腔粘连的生物组合物，包括ShakeGel^TM3D和通过流式、成脂诱导分化、成骨诱导分化、成软骨诱导分化鉴定的自体ADSCs，按体积1：1均匀混合而成。该生物组合物的制备方法包括：从分离提取自体ADSCs，通过流式、成脂诱导分化、成骨诱导分化、成软骨诱导分化鉴定ADSCs，再与ShakeGel^TM3D结合培养。本发明ShakeGel^TM3D可为自体ADSCs创造一个可行的三维生长环境，ShakeGel^TM3D与自体ADSCs组合物的联合移植通过增加BMP7‑Smad5信号转导促进受损子宫内膜组织的恢复，使子宫内膜增厚，腺体数量增加，纤维化减少，从而使宫腔粘连的小鼠生育能力恢复。

技术领域

本发明涉及汽车生物技术领域，更为具体地说是指一种用于修复宫腔粘连的生物组合物及其制备方法。

背景技术

宫腔粘连(Intrauterine adhesion, IUA)是由于子宫内膜基底层损伤引起的子宫腔和/或子宫颈管部分或完全闭塞，它也是子宫不孕症最常见的原因。目前关于IUA的发病机制有多种假说，包括纤维化增生理论、神经反射理论、干细胞分化异常、宫腔微环境改变及纤维化、信号通路调控异常、促进炎症反应等。由于IUA的病理特征属于子宫内膜纤维化，因此纤维化增生理论是目前研究最广泛的假说。宫腔粘连是子宫手术的一种严重并发症，可导致女性生殖系统成千上万的健康问题，如月经异常、反复流产、周期性腹痛、不孕症和妊娠相关并发症。因此，重建一个正常的宫腔，恢复子宫功能是IUA治疗的目标。

宫腔粘连的传统治疗方法是宫腔镜下粘连切除后再结合各种辅助治疗的应用。然而，这些抗粘连策略有一些缺点和不足，如二次手术的复发、隔离面积有限、宫内炎症反应的诱导、子宫内膜再生困难等，这些迫使宫腔粘连的继续研究并探索新的治疗方案。为此，我们提供一种用于修复宫腔粘连的生物组合物及其制备方法。

发明内容

本发明提供一种用于修复宫腔粘连的生物组合物及其制备方法，为宫腔粘连患者提供良好的治疗药剂。

本发明采用如下技术方案：

一种用于修复宫腔粘连的生物组合物，包括ShakeGel^TM3D凝胶液和通过流式、成脂诱导分化、成骨诱导分化、成软骨诱导分化鉴定的自体脂肪间充质干细胞，按体积1：1均匀混合而成。

进一步地，所述自体脂肪间充质干细胞从动物腹股沟的白色脂肪组织中提取。

本发明还提供一种用于修复宫腔粘连的生物组合物的制备方法，包括以下步骤：

（1）、提取与培养小鼠的自体脂肪间充质干细胞；（2）、对步骤（1）的脂肪间充质干细胞进行成骨诱导、成脂诱导分化以及成软骨诱导分化处理；（3）、取步骤（2）处理后的脂肪间充质干细胞上清培养液进行流式细胞分析；（4）、在状态良好的脂肪间充质干细胞加入GFP慢性病毒培养基混合液继续培养；（5）、将ShakeGel^TM3D凝胶液与步骤（4）培养得到的自体脂肪干细胞按体积1：1进行离心混匀，制得生物组合物。

进一步地，上述步骤（1）小鼠自体脂肪间充质干细胞的提取和培养过程如下：1）剥离并收集3-4周龄的雌性小鼠腹股沟脂肪组织，放入装有提前预热至37℃KRP buffer的离心管中；2）将脂肪组织从KRP buffer转移到细胞培养皿，采用预热的PBS洗涤两次，按照体积比4：1放入新的KRP buffer，并将脂肪组织剪碎成小块；3）吸取上层脂肪悬浮物加入到新的无菌试管，加入等体积浓度为0.75mg/ml的胶原酶Ⅱ；4）将无菌试管密封后放入37℃水浴缓慢摇动45分钟，使脂肪悬浮物消化到分离细胞层悬浮在液体最上层与其它沉淀的组织碎片分开时，加入预热的PBS，中和胶原酶Ⅱ，终止消化；5）离心分离脂肪干细胞沉淀，吸弃上层混合液；6）加入红细胞裂解液重悬沉淀，裂解10min，再离心摒弃上清液，留下脂肪干细胞沉淀；7）将脂肪干细胞培养基重悬细胞沉淀铺在细胞培养皿中。