[发明专利]三七姜乙酸乙酯部位的指纹图谱和质量分析方法

说明书

本发明公开了一种三七姜乙酸乙酯部位的指纹图谱和质量分析方法，属于药品分析技术领域,首先建立了三七姜乙酸乙酯部位的指纹图谱，利用三七姜乙酸乙酯部位的指纹图谱与镇痛抗炎建立谱效关系，并基于所述谱效关系建立三七姜质量评价标准；阐明三七姜乙酸乙酯部位中的化学成分与镇痛抗炎药效之间的相关性；对三七姜提取物的药效研究，探讨三七姜外用药理作用位，为之后的深入研究提供科学依据。

技术领域

本发明属于药品分析技术领域，尤其是涉及一种三七姜乙酸乙酯部位的指纹图谱和质量分析方法。

背景技术

三七姜在《广西中草药》中记载有活血散瘀、消肿止痛之功。《广西民族药简编》载：外用捣烂敷患处治跌打损伤。《全国中草药汇编》中记载主治跌打损伤，风湿骨痛。《中华本草》记载：治疗跌打损伤，外用酒炒热敷患处。现代药理研究，三七姜醇提物具有抗炎作用。民间常以三七姜根茎入药作为野生草药使用后，发现对风湿性骨关节疼痛有一定疗效。用于治疗风湿骨痛，吐血衄血，月经过多等疾病，炒炭后研粉撒患处用于散淤消肿、活血止血、行气止痛、跌打损伤、虫咬蛇伤、外伤出血等。

近年来，中药指纹图谱分析技术的广泛应用推动了其发展，不仅提升了中药材和中成药的质量标准也让产品整体质量水平得以进步。但目前没有关于三七姜指纹图谱的研究，且目前对指纹图谱的评价多采用相似度分析作为基本评价方法，对三七姜的外用功能相关方面的研究报道较少。

因此，为了筛选出三七姜的药效活性部，对三七姜提取物的药效研究，探讨三七姜外用药理作用位，为之后的深入研究提供科学依据，需要对三七姜有效药用部位进行研究、确立标准指纹图谱和质量分析方法。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种三七姜乙酸乙酯部位的指纹图谱和质量分析方法，确定了三七姜的标准指纹图谱，通过对三七姜乙酸乙酯部位的镇痛抗炎药效与指纹图谱建立谱效关系的分析，阐明三七姜乙酸乙酯部位中的化学成分与镇痛抗炎药效之间的相关性。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

三七姜乙酸乙酯部位的指纹图谱，是采用如下方法构建的：

(1)供试品溶液的制备：

①制备三七姜乙醇提取物：称取三七姜粗粉，粉碎后过16目筛，加入其7-8倍体积量的80％乙醇溶液，加热回流提取2h，重复3次，滤过并收集滤液，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到乙醇总提取物；

②提取乙酸乙酯部位：将所述乙醇总提取物用纯水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取至溶液颜色至澄清透明，得到乙酸乙酯萃取部位的药液，减压浓缩，放置水浴蒸干，即得到乙酸乙酯部位提取物，备用；

③制备供试品溶液：取乙酸乙酯部位提取物0.1g，精密称定，用5mL甲醇超声提取5min，加甲醇定容至10mL，过滤，将所述滤液13000r/min离心10min，取上清液，过0.22μm微孔滤膜，即得供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：各称取对羟基苯甲酸、原儿茶酸、对羟基苯甲醛对照品，分别加甲醇溶解制备质量浓度分别为0.212、0.236、0.149mg/mL的混合对照品溶液；

(3)采用高效液相色谱法分析上述供试品溶液和对照品溶液，按照如下色谱条件进行色谱图采集，采用液相工作站对色谱图处理，再导入至中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件中，得到对指纹图谱；所述色谱条件为：进样量10μL；以乙腈为流动相B，0.1％磷酸溶液或0.1％甲酸溶液或0.1％冰醋酸溶液为流动相A，进行梯度洗脱:0min→20min、10％→60％B，20min→50min、60％→80％B，50min→65min、80％→100％B，65min→75min、100％B，流速：0.8～1.2mL/min，柱温30℃，检测波长260nm。

进一步地，所述流动相A为0.1％磷酸溶液；所述流速为0.8mL/min。