[发明专利]具有广谱性识别A型流感病毒NP蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了2株具有广谱性识别A型流感病毒NP蛋白的单克隆抗体及其应用。所述的单克隆抗体分别命名为3D4(CCTCCNO:C202177)、4B9(CCTCCNO:C202176)，3D4的重链及轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.3所示，4B9重链及轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.5和SEQ ID No.3所示。本发明公开的2株单克隆抗体分别针对NP蛋白的不同抗原表位，除了均能够与H1～H11等不同HA亚型的禽流感病毒发生反应，还均能够结合H1和H3亚型的猪流感与人流感病毒，在识别不同亚型、不同宿主来源的A型流感病毒中均呈现良好的广谱性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，主要涉及两株可稳定分泌具有广谱性识别A型流感病毒NP蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，同时涉及该两株杂交瘤细胞株所分泌的两种单克隆抗体及其应用。

背景技术

正黏病毒科的流感病毒可分为A、B、C、D四型，其中A型流感病毒(Influenza Avirus,IAV)感染的宿主范围最为广泛，包括人、禽、猪、马、犬等多种动物，并能造成流感的大流行，无论是对畜禽养殖还是人类健康均造成了极为严重的危害(Shuo Su,Min Gu,DiLiu,et al.Epidemiology,Evolution,and Pathogenesis of H7N9 Influenza Virusesin Five Epidemic Waves since 2013in China[J].Trends in Microbiology,2017,25(9):713-728)。IAV的基因组由8个分节段的单股负链RNA构成，分别为PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS基因节段，共编码包括血凝素HA、神经氨酸酶NA等在内的10余种蛋白。其中，核衣壳蛋白NP与基质蛋白M1的抗原性差异是不同型别流感病毒的分型依据；而HA和NA的抗原性差异又可作为进一步区分IAV不同亚型的依据(Jeffery KTaubenberger and JohnCKash.Influenza Virus Evolution,Host Adaptation,and Pandemic Formation[J].Cell HostMicrobe,2010,7(6):440-451)。目前报道，IAV存在H1-H18共18种HA亚型和N1-N11共11种NA亚型(Khristine Kaith S Lloren,Taehyung Lee,Jin Jung Kwon,etal.Molecular Markers for Interspecies Transmission of Avian Influenza Virusesin Mammalian Hosts[J].International journal of molecular sciences,2017,18(12):2706)。禽流感病毒中，H9N2、H7N9和包括H5N1、H5N6等多种NA亚型的H5NX是全球范围内严重影响禽类生产的主要亚型，同时它们也因造成了不少人感染甚至死亡的病例而具有相当的公共卫生意义(John Steel and Anice C Lowen.Influenza A virusreassortment[J].Current topics in microbiology and immunology,2014,385:377-401)。在人流感病毒和猪流感病毒中，主要流行的是H1N1和H3N2亚型，该两种亚型均导致过人类的流感大流行并成为了引起季节性流感的稳定组份(https://www.who.int/influenza/surveillance_monitoring/updates/en/)；猪群中流行的欧亚类禽(Eurasianavian-like,EA)H1N1病毒还被指出是最有可能引起下一次人类流感大流行的动物流感病毒(Huanliang Yang,Yan Chen,Chuanling Qiao,et al.Prevalence,genetics,andtransmissibility in ferrets of Eurasian avian-like H1N1 swine influenzaviruses[J].Proc Natl Acad Sci U S A.2016,113(2):392-397)。此外，随着H10N8、H6N1等低致病性禽流感病毒也被报道可以直接跨种传播到人并致病，研究人员推测任何一种禽流感病毒亚型都可能具有成为人畜共患病原的潜能(Damien A M Philippon,Peng Wu,Benjamin JCowling,et al.Avian Influenza Human Infections at the Human-AnimalInterface[J].J Infect Dis.2020,222(4):528-537)。因此，亟需建立一种高效、快速，并能够广谱性识别IAV的检测方法，这对于有效预防和控制禽流感、猪流感、人流感等不同宿主来源的人畜流感，以及可能的流感疫情的早期预警，均具有重要的现实意义(Qian Xiao,Zhenwei Bi,Lu Yao,et al.Novel protein microarray for the detection of avianinfluenza virus antibodies and simultaneous distinction of antibodies againstH5 and H7 subtypes[J].Avian Pathology,2019,48(6):528-536)。