[发明专利]一种防止水产养殖动物致病的免疫因子的制备方法及使用方法

说明书

本发明涉及生物工程领域，具体的说是一种防止水产养殖动物致病的免疫因子的制备方法及使用方法。本发明采用的技术方案为：一种防止水产养殖动物致病的免疫因子的制备方法及使用方法，其包括下列步骤：1）致病菌培养基制备及2）免疫因子制备。使用时，以拌料方式或直接撒播的方式对动物进行免疫操作。本发明的有效成分大部分是简单的培养基成分，部分组分源自养殖场环境，不会对养殖生物和环境产生影响，无毒无害，安全环保，而且价格低廉，简单可行，可以实现规模化生产。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体的说是一种防止水产养殖动物致病的免疫因子的制备方法及使用方法。

背景技术

水产养殖养殖业是我国重要的农业活动之一，能够为广大国民提供优质的食粮，为工业发展提供大量原料，同时能够大量弥补海洋捕捞，有利于维持环境生态平衡。然而，近几年致病菌病害成为水产养殖快速发展的瓶颈之一。目前，因微生物引发的病害涉及几乎全部养殖品种，仅2017年，微生物病害导致的经济损失就高达360亿。其中，弧菌病已经成为水产养殖业病害的最主要拦路虎，甚至达到“谈弧色变”的程度。致病菌在水产养殖中是一直存在的，一般情况下致病菌浓度相对较低，不会对养殖生物产生致死性感染，然后当环境出现异常利于致病菌大量繁殖，或者养殖生物出现亚健康状态时，致病菌就会大量繁殖，污染水体，感染养殖生物，并导致其生长迟缓乃至大量死亡。

如何防治弧菌病害，一直是水产研究的重点。目前采用较多的方法是抗生素疗法，但后期由于抗生素的广泛使用、滥用和过度使用，耐药细菌菌株（包括多耐药菌株）大量出现与流行，抗生素治疗效果受到严峻的挑战。尤其，“超级病菌”频繁出现，它们几乎对所有的抗生素都不敏感。此外，较为可行的方法就是疫苗免疫，但此类免疫的实际应用面相对较窄，一般只针对个别致病菌，例如大型生物的鸡瘟、兔瘟等；而且，疫苗的获得周期较长，一般需要几月乃至几年的时间，不能解决水产动物的快速死亡问题；此外，疫苗需要人工注射免疫，对于鲍、虾、蟹、蛤等小体积的养殖生物并不适用。因此，在水产领域依靠抗生素和疫苗进行抗病性免疫基本不可行。在此背景下，如何有效快速的让水产养殖动物产生免疫能力，将成为病害发生时养殖是否成功的关键。

发明内容

针对目前水产养殖动物致病的技术问题，本发明的目的之一是提供一种防止水产养殖动物致病的免疫因子的制备方法；本发明的目的之二是提供一种该免疫因子的使用方法。

为实现上述技术目的，本发明采用的技术方案为：一种防止水产养殖动物致病的免疫因子的制备方法，其包括下列步骤：

1）致病菌培养基制备

在溶剂中加入终浓度为4g/L的蛋白胨、1g/L酵母膏或酵母浸粉以及1g/L醋酸钠，混匀至溶解后灭菌处理形成致病菌培养基；

2）免疫因子制备

提取发病组织，放置于步骤1）所制备的致病菌培养基中，添加比例为1-5%（w/v）；然后将培养基置于28℃条件下培养至培养基中的OD₆₀₀值为1-1.5结束培养，然后对培养基进行灭菌处理，冷却后保存在4℃条件下形成免疫因子。

进一步的，所述步骤1）中在灭菌处理之前对致病菌培养基的pH值调整为7.8。

进一步的，当确认病原微生物为弧菌，步骤1）中还需要在溶剂中添加终浓度为3g/L的牛胆酸钠、5g/L的牛胆粉、10g/L的硫代硫酸钠和1g/L的柠檬酸铁，将pH调节至8.6。

进一步的，所述步骤1）中的灭菌处理是121℃高压灭菌18 min，或110℃高压灭菌25 min，亦或煮沸30 min。

进一步的，所述步骤1）中的溶剂为养殖环境中的海水或淡水。

进一步的，所述步骤2）中的发病组织是在养殖生物中挑选即将死亡但未死亡且病害特征显著的动物的发病组织，在保证组织样品存活的情况下，迅速将组织样本使用无菌海水清洗3遍，然后在无菌环境下切成小块。