[发明专利]一种体外诱导人体细胞重编程为神经元细胞的方法有效
| 申请号： | 202110326257.6 | 申请日： | 2021-03-26 |
| 公开（公告）号： | CN113278585B | 公开（公告）日： | 2023-09-15 |
| 发明（设计）人： | 黄奔;王国栋;张丹丹;刘权辉;吴玉莲;吕丹薇;胡吉刚;谢小莲 | 申请（专利权）人： | 广西大学;广西犇彭生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0797 | 分类号： | C12N5/0797 |
| 代理公司： | 天津企兴智财知识产权代理有限公司 12226 | 代理人： | 李彦彦 |
| 地址： | 530001 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 体外 诱导 人体 细胞 编程 神经元 方法 | ||
1.一种体外诱导人体细胞重编程为神经元细胞的方法，其特征在于：使用诱导培养基进行体外诱导体细胞重编程为神经元细胞，所述诱导培养基包括基础液、KSR以及小分子化合物；所述小分子化合物包括Forskolin、cAMP中的一种或两种；
所述体细胞为皮肤成纤维细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：小分子化合物Forskolin、cAMP，各自的浓度依次分别为5-20μM、0.5-5mM。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：小分子化合物Forskolin、cAMP，各自的浓度依次分别为10μM、1mM。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：基础液、KSR的体积比为80:20。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：基础液为N2B27，包括Knockout DMEM/F12、N2 100×、Neurobasal、B27 50×、Glutamine 100×；且几者的体积比为99:1:97:2:1。
6.一种使用诱导培养基进行体外诱导人体细胞重编程为神经元细胞的方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)将体细胞接种于培养皿中，接种后加入高糖DMEM+10％FBS，置于5％二氧化碳，湿度95％，37℃的培养箱，培养过夜后更换诱导培养基，所述诱导培养基包括基础液、KSR以及小分子化合物，小分子化合物包括Forskolin、cAMP，且在最终培养基中，小分子化合物Forskolin、cAMP各自的浓度依次分别为5-20μM、0.5-5mM，基础液、KSR的体积比为80:20，基础液为N2B27，包括Knockout DMEM/F12、N2 100×、Neurobasal、B27 50×、Glutamine100×；且几者的体积比为99:1:97:2:1，诱导培养48h后获得诱导神经元；
2)将培养基更换为神经元成熟培养基，继续促进诱导后的神经元进一步成熟，72h后更换为神经元培养基，进行长时间培养；
所述体细胞为皮肤成纤维细胞。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：神经元成熟培养基的成分包括体积比为1:1的DMEM/F12和Neurobasal，0.5％体积百分比N2，1％体积百分比B27，100μM cAMP，20ng/mLbFGF，20ng/mL BDNF，20ng/mL GDNF，20ng/mL NT3，100U/mL青霉素和0.1mg/mL链霉素。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：神经元培养基的成分包括体积比1:1的DMEM/F12：Neurobasal，0.5％体积百分比N2，1％体积百分比B27，20ng/mL bFGF，20ng/mLBDNF，20ng/mL GDNF，20ng/mL NT3，100U/mL青霉素和0.1mg/mL链霉素。
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