[发明专利]一种γ干扰素试剂条、制备方法及其制备装置

说明书

本发明公开了一种γ干扰素试剂条、制备方法及其制备装置，硝酸纤维膜具有检测线和质控线，检测线和质控线位于硝酸纤维膜的一侧，衬板与硝酸纤维膜固定连接，并位于硝酸纤维膜远离检测线和质控线的一侧，吸水纸与硝酸纤维膜和衬板固定连接，并位于靠近质控线的一侧，胶体量子垫与硝酸纤维膜和衬板固定连接，并位于靠近检测线的一侧，样品垫与胶体量子垫和衬板固定连接，并位于胶体量子垫远离硝酸纤维膜的一侧。本试剂条制作简便、反应快速、特异性强。

技术领域

本发明涉及免疫荧光层析技术领域，尤其涉及一种γ干扰素试剂条、制备方法及其制备装置。

背景技术

干扰素(interferon，IFN)由一族分泌蛋白质组成，对同种病毒具有广谱抗病毒活性，存在于各种脊椎动物体内。平时细胞内含量很低，经病毒或其它干扰素诱导剂诱导后产量可以提高。IFN蛋白家族基于它们的基因序列、染色体定位和受体特异性分为3型，即I型、Ⅱ型和Ⅲ型干扰素。Ⅱ型干扰素由单基因家族IFN-γ构成，又称为免疫干扰素；干扰素-γ主要是由抗原、有丝分裂素等刺激、活化的CD4+Th、CD8+T细胞及NK细胞所分泌的一类可溶性糖蛋白。IFN-γ释放试验对于疾病的诊断，如肺结核等疾病具有重大意义，其中两种较为成熟的方法：全血干扰素试剂检验(QuantiFERON-TB GOLD)，和结核T细胞斑点检测(T-SPOTTB)，其对应的试剂盒先后被美国FDA批准应用于临床，CDC为其指定了使用指南。

ELISA法通过显色反应，在酶标仪上测定吸光度，与标准曲线比较得出可溶性蛋白总量；ELISPOT法通过显色反应，在细胞分泌的可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点，可直接在显微镜下人工计数斑点或通过计算机辅助的分析系统对斑点进行计数从而计算出分泌该蛋白或者细胞因子的生成量。ELISPOT法来源于ELISA，相比较传统的ELISA法有所突破，是定量ELISA技术的延伸和发展，其灵敏度更高，但步骤更复杂，不够快捷，经济。

发明内容

本发明的目的在于提供一种γ干扰素试剂条、制备方法及其制备装置，旨在解决现有检测手段步骤复杂，不够快捷经济的问题。

为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种γ干扰素试剂条，包括样品垫、胶体量子垫、硝酸纤维膜、吸水纸和衬板，所述硝酸纤维膜具有检测线和质控线，所述检测线和所述质控线位于所述硝酸纤维膜的一侧，所述衬板与所述硝酸纤维膜固定连接，并位于所述硝酸纤维膜远离所述检测线和所述质控线的一侧，所述吸水纸与所述硝酸纤维膜和所述衬板固定连接，并位于靠近所述质控线的一侧，所述胶体量子垫与所述硝酸纤维膜和所述衬板固定连接，并位于靠近所述检测线的一侧，所述样品垫与所述胶体量子垫和所述衬板固定连接，并位于所述胶体量子垫远离所述硝酸纤维膜的一侧。

第二方面，本发明还提供一种干扰素试剂条的制备方法，包括：制备样品垫；制备胶体量子垫；制备硝酸纤维素膜上的检测线和质控线；将衬板、硝酸纤维膜、胶体量子垫和样品垫进行组合。

其中，所述制备样品垫的具体步骤是：采用50mmol/L、pH 8.0的三羟甲基氨基甲烷、质量百分浓度为0.5％的Tetronic-1307、质量百分浓度为0.1％的proclin-300和去离子水制取样品垫优化缓冲液；将样品垫浸没在样品垫优化缓冲液中，浸没30～45min，然后干燥5h以上，湿度控制在30％以下。

其中，所述制备胶体量子垫的具体步骤是：制取量子垫优化缓冲液；将量子垫浸没在量子垫优化缓冲液中，浸没30～45min，然后干燥5h以上，湿度控制在30％以下；建立胶体量子点活化体系；胶体量子点偶联链霉亲和素；用Sephadex C-100层析柱用PH为7.4的磷酸盐缓冲液洗脱，分离纯化后可得胶体量子点标记的链霉亲和素；建立生物素标记抗体缓冲体系；建立生物素标记体系；加入3％BSA封闭，等量甘油，-20℃保存，制得胶体量子点；将胶体量子点用划膜喷金仪以1μL/cm的量喷涂在胶体量子垫上，干燥0.5h。