[发明专利]利用双相酶促反应制备淫羊藿苷的方法

说明书

本申请涉及一种利用双相酶促反应制备淫羊藿苷的方法，其中，该反应使用酶将淫羊藿提取物中的朝藿定A/B/C转化为酶解产物淫羊藿苷，其步骤包括：‑制备淫羊藿提取物的步骤；‑进行双相酶促反应的步骤，其中，第一相为缓冲液相，且第一相对于淫羊藿提取物中的朝藿定A/B/C具有良好的溶解性，而第二相为有机相，且第二相对于作为酶解产物的淫羊藿苷具有良好的溶解性；‑对产物淫羊藿苷分离纯化的步骤；其中，用于该双相酶促反应的酶包裹有非水溶性淀粉，使得该酶在该双相酶促反应进行时处于第一相和第二相的相界面处。

技术领域

本申请属于生物化工领域，具体涉及一种利用双相酶促反应由淫羊藿提 取物制备淫羊藿苷的方法。

背景技术

淫羊藿是我国传统中药，其具有补肾壮阳、强壮筋骨，增强免疫力等功 效，经常被用在治疗骨质疏松、促进心肌细胞再生和分化、延缓衰老等方面。 淫羊藿中发挥功效的主要活性成分为黄酮类化合物，这些化合物主要是以糖 苷的形式存在与淫羊藿中，其中淫羊藿苷是近些年来学者研究较多的具有上 述功效的黄酮类化合物之一。但是，由于淫羊藿生长地址环境、采摘期的不 同，淫羊藿苷的含量差别很大，其基本含量通常在2％以下。相对而言，比 淫羊藿苷极性更大的朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的含量在巫山淫羊藿中 含量丰富，可以达到2.5％～16.8％。淫羊藿苷分别可以通过朝藿定A脱去一 分子的rha和一分子的glc；朝藿定B脱去一分子的xyl和一分子的glc；朝 藿定C脱去两分子的rha来得到。因此可以采用酶促反应法，将淫羊藿中含 量较高的朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C完全转化为淫羊藿苷，从而大量制 得淫羊藿苷，为后期淫羊藿苷相关产品开发提供原料支持。

双相反应体系是一种温和的生物反应分离萃取体系，非常适合于反应产 物对酶活有抑制的反应体系。由于酶反应一般需要完全的水溶液环境下进 行，反应过程中产生的产物、副产物可能会抑制反应过程中的酶反应效率， 使得反应过程不能稳定、持续有效的进行，这也间接地浪费了很多酶资源。 为了解决上述问题，同时可以使得反应产物及时地得到分离和浓缩干燥，节 省时间成本。我们可以利用缓冲液和有机溶剂双相体系，酶和反应底物在水 相中发生酶促反应，反应产物被不断的萃取到有机相中，进而可以将反应产物及时地分离出去，并进行下一步的浓缩干燥。但是这个过程中需要对酶在 所采用的有机溶剂相中的耐受性，以及反应产物在有机相中的稳定性进行考 察和筛选。现有技术中，有将酶在喷雾干燥过程中与非水溶性的淀粉一起干 燥制粒的制备工艺；而我们将这种形式的酶应用于双相酶促反应体系，此时， 携带酶的非水溶性的淀粉颗粒处于两相界面，有效地减少了酶分子与有机相 的接触，从而保证了酶活力的稳定。该双相酶促反应技术应用在工业化生产 淫羊藿苷领域具有广阔的应用前景。

发明内容

本申请提供了下述技术方案：

1.一种利用双相酶促反应制备淫羊藿苷的方法，该反应使用酶将淫羊藿 提取物中的朝藿定A/B/C转化为酶解产物淫羊藿苷，其步骤包括：

-制备淫羊藿提取物的步骤；

-进行双相酶促反应的步骤，其中，在双相酶促反应中，第一相为缓冲 液相，且第一相对于朝藿定A/B/C具有良好的溶解性，而第二相为有机相， 且第二相对于淫羊藿苷具有良好的溶解性；

-从第二相分离纯化出产物淫羊藿苷的步骤。

2.如项1所述的制备淫羊藿苷的方法，其中，在制备淫羊藿提取物的步 骤中，取粉碎后的淫羊藿加入70％-90％的乙醇提取，淫羊藿和乙醇的质量比 为1:10-1:30，然后减压浓缩干燥得淫羊藿提取物。

3.如项1所述的制备淫羊藿苷的方法，其中，用于该双相酶促反应的酶 包裹有非水溶性淀粉，使得所述酶在该双相酶促反应进行时处于第一相和第 二相的相界面处；所述双相酶促反应中的酶为鼠李糖苷酶、木糖苷酶和/或葡 萄糖苷酶。

4.如项1所述的制备淫羊藿苷的方法，其中，所述有机相为三氯甲烷、 异丙醚或乙酸乙酯。