[发明专利]一种基于形态学和分子鉴定识别橡胶草的方法

说明书

本发明公开了一种基于形态学和分子鉴定识别橡胶草的方法，选取待测橡胶草完整的植物组织；选择所述待测橡胶草进行形态学观察初筛得到一次筛选的橡胶草；对筛选后的所述橡胶草进行分子鉴定，对获得的数据进行统计和分析输出结果；通过所述结果鉴定识别所述待测橡胶草。本发明可以结合形态学观察和分子水平共同鉴定，能够排除蒲公英与橡胶草杂种干扰，既适于从野外橡胶草的植物材料收取，还可用于橡胶草纯种种质保存。

技术领域

本发明属于植物组织鉴定技术领域，尤其涉及一种基于形态学和分子鉴定识别橡胶草的方法。

背景技术

橡胶草其中甲羟戊酸(MVA)途径中用于调节天然橡胶生物合成，橡胶草是二倍体(2n＝16)，具有相对简单的基因组，长度为1.29Gb，其中包含46,731个预测的蛋白质编码基因，橡胶草根含有高分子量橡胶分子，其特性与巴西橡胶树的橡胶胶乳相当，可以作为一种替代橡胶作物，橡胶草根的橡胶含量高，占其总干重的3％至28％[17]，它们也是菊粉的新来源(线性β-(2-1)-连锁果聚糖)，这是另一种丰富的蒲公英代谢产物，存储在韧皮部附近的实质根细胞液泡中，与质外分离的乳胶虫相邻，是食品工业和生物乙醇生产的重要材料。此外，橡胶草可以在相对较短的生命周期中在寒冷和温带地区广泛生长，并且易于收获和进行遗传转化，因此可以用作发明小麦基因功能的理想模型植物。天然橡胶的生物合成材料。

但是，由于橡胶草植物特征容易与其他蒲公英混淆，普通蒲公英叶片为羽状，边缘呈锯齿状，基部为楔形，而橡胶草叶片为楔形，叶缘几乎光滑而圆形。从许多橡胶草组织中可以检测到大量的胶乳细胞和橡胶颗粒，并且橡胶草的干燥根含有大量的天然橡胶,胶乳细胞和橡胶颗粒只能在橡胶草的静脉，茎和根中检查,其根乳胶中的平均分子量为2180kDa，这与从蒲公英中获得的非常相似。因此，单纯冲分子量进行比较难以区别橡胶草和蒲公英。因此需要一种基于形态学和分子鉴定识别橡胶草的方法。

发明内容

本发明提供一种排除蒲公英与橡胶草杂种干扰，基于形态学和分子鉴定识别橡胶草的方法。

本发明包括以下步骤：

A选取待测橡胶草完整的植物组织；

B选择所述待测橡胶草进行形态学观察初筛得到一次筛选的橡胶草；

C对筛选后的所述橡胶草进行分子鉴定，对获得的数据进行统计和分析输出结果；

D通过所述结果鉴定识别所述待测橡胶草；

进一步地，所述分子鉴定的方法包括

a利用层析法待测橡胶草提取叶绿体后；

b提取橡胶草叶绿体的总DNA，用橡胶草叶绿体物种特异性标记 C5基因进行检测进行PCR后；

c经1.2％的琼脂糖凝胶电泳检测，其显示橡胶草和普通蒲公英正确条带(659bp)，

d用TaqI酶进行PCR产物单酶切，在橡胶草(C5)产物中会出现多条不定片段的多态性现象，酶切后能够出现多态性条带，由此确定为橡胶草。

进一步地，所述形态学观察的方法包括

A获取标准橡胶草的特征图像中并选定清晰而且具有特征明显的图形；

B将所述标准橡胶草的图像数据进行记录储存，作为待测橡胶草的图像比对的标准图像数据并储存于植物特征数据库；

C当橡胶草需要进行识别鉴定时，利用植物特征数据库中橡胶草模型或者在实时现场应用同样的方法测量橡胶草特征图形对应的数据进行计算并比对；

进一步地，所述反应体系为：

DNA 2μL

TaKaRa 1×PCRMix7μL

Primers 1μL