[发明专利]赖氨酸脱羧酶突变体、其编码基因及应用有效
| 申请号： | 202110319193.7 | 申请日： | 2021-03-25 |
| 公开（公告）号： | CN112899261B | 公开（公告）日： | 2022-03-29 |
| 发明（设计）人： | 张才达;任丽梅;高文杲;闫利军;李丽;张建坤;刘东 | 申请（专利权）人： | 美邦美和生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12N1/21;C12N11/089;C12P13/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 石家庄国域专利商标事务所有限公司 13112 | 代理人： | 张莉静 |
| 地址： | 050000 河北省石家庄市高*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 赖氨酸 脱羧酶 突变体 编码 基因 应用 | ||
1.一种赖氨酸脱羧酶突变体，其特征在于，其为突变体3，所述突变体3是在氨基酸序列如SEQ：ID：NO:1所示的赖氨酸脱羧酶的基础上，将其第170位的Phe突变为Gly、第648位的Met突变为Lys。
2.根据权利要求1所述的赖氨酸脱羧酶突变体，其特征在于，其为突变体4、突变体5或突变体6，其中，所述突变体4在突变体3的基础上，将其第69位的Glu突变为Asp；所述突变体5是在突变体3的基础上，将其第180位的Ile突变为Val；所述突变体6是在突变体3的基础上，将其第69位的Glu突变为Asp、第180位的Ile突变为Val。
3.编码权利要求1所述的赖氨酸脱羧酶突变体的基因，其特征在于，编码突变体3的基因序列如SEQ：ID：NO:4所示。
4.编码权利要求2所述的赖氨酸脱羧酶突变体的基因，其特征在于，编码突变体4的基因序列如SEQ：ID：NO:6所示；编码突变体5的基因序列如SEQ：ID：NO:8所示；编码突变体6的基因序列如SEQ：ID：NO:10所示。
5.一种重组质粒，其特征在于，其包含有权利要求3或权利要求4中任一编码突变体的基因，所述重组质粒的起始载体选用pET系列载体。
6.根据权利要求5所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒的起始载体选用pET22b载体。
7.一种重组菌株，其特征在于，其包含权利要求5或权利要求6所述的重组质粒，所述重组菌株为大肠杆菌。
8.一种表达赖氨酸脱羧酶突变体的方法，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求5或权利要求6所述的重组质粒转化至大肠杆菌菌株中，得到重组菌株；将重组菌株活化后接种于LB培养基或发酵培养基中，待菌体OD600值达到0.6-30时，加入IPTG诱导表达赖氨酸脱羧酶突变体；所述IPTG在培养基中终浓度为0.1-1mM，所述诱导条件为16-37℃，诱导时间为4-48h。
9.权利要求1或2所述的赖氨酸脱羧酶突变体在合成1,5-戊二胺、尼龙56盐中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，通过固定化酶技术，将所述突变体制成固定化突变酶并应用于合成1,5-戊二胺、尼龙56盐中。
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