[发明专利]一种牙周膜干细胞培养基及其培养方法

说明书

本发明公开了一种牙周膜干细胞培养基，由以下成分组成：基础培养基、二羟丙茶碱、黄藤素、PDE 4抑制剂、谷胱甘肽、2‑巯基乙醇。本发明提供一种牙周膜干细胞培养基，在培养基中添加二羟丙茶碱、黄藤素、PDE 4抑制剂协同作用，刺激牙周膜干细胞分裂，有效提高牙周膜干细胞的增殖能力，能在短时间内获得大量的牙周膜干细胞，提高细胞的增值速度，为牙周组织工程提供种子细胞来源，并且本发明的培养基不添加动物血清，提高了临床应用的安全性。本发明还提供了一种牙周膜干细胞的培养方法，采用本发明提供的培养基，以传代培养得到的P3‑P5代细胞为培养对象，实现牙周膜干细胞的快速扩增，方法简单易于操作，有效降低生产成本。

技术领域

本发明涉及干细胞领域，尤其涉及一种牙周膜干细胞培养基及其培养方法。

背景技术

目前，牙周组织再生是治疗牙周病的有效途径和最终目的。然而，传统治疗、刮治、根面平整等基础治疗，只能消除病因，无法完全修复已丧失的牙周组织，疗效甚微。随着组织工程的发展，研究者们将复合的种子细胞与支架的复合物移植到缺损部位，为被破坏的牙周组织的再生带来希望。

自2004年Seo等从牙周膜组织中分离出牙周膜干细胞（periodontal ligamentstem cells,PDLSCs）以来，该细胞就被认为是牙周组织工程的首选种子细胞，具有组我更新能力，能分化为牙周的三种组织：牙槽骨、牙周膜和牙骨质。一系列现有研究均证明PDLSCs是治疗牙周疾病的理想细胞。

传统的牙周膜干细胞培养需要添加胎牛血清，有引入异源血清携带的细菌、病毒的风险，再者血清培养的细胞产率、传代次数有限，极大限制了牙周膜干细胞的应用。牙周膜干细胞的研究和应用需要足够数量的细胞，因此就要求细胞在培养过程中具有较好的活性和增殖速度。对牙周膜干细胞的培养基提出了更高的要求。

现有技术中虽然公开了采用无血清培养基培养牙周膜干细胞，但是，目前的牙周膜干细胞无血清培养基存在培养的细胞活性差，增殖速率慢等问题，不能满足牙周膜干细胞的科研或临床需求，因此提高牙周膜干细胞的体外增殖能力显得尤为重要。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种牙周膜干细胞培养基，成分明确，能有效实现牙周膜干细胞的体外快速扩增，为满足牙周膜干细胞的使用需求提供保障。

本发明的目的之二在于提供一种牙周膜干细胞的培养方法。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种牙周膜干细胞培养基，由以下成分组成：基础培养基、二羟丙茶碱、黄藤素、PDE 4抑制剂、谷胱甘肽、2-巯基乙醇。

进一步地，以培养基终浓度计，各组分的质量浓度为：二羟丙茶碱2.0-8.5μg/mL、黄藤素9.8-12.0μg/mL、PDE 4抑制剂5.0-10.0ng/mL、谷胱甘肽1.0-2.0μg/mL、2-巯基乙醇10.0-14.5μg/mL。

进一步地，以培养基终浓度计，各组分的质量浓度为：二羟丙茶碱4.5μg/mL、黄藤素11.0μg/mL、PDE 4抑制剂8.5ng/mL、谷胱甘肽1.5μg/mL、2-巯基乙醇13.0μg/mL。

进一步地，所述基础培养基为DMEM/F12培养基。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

一种牙周膜干细胞的培养方法，包括以下步骤：将待培养的牙周膜干细胞接种于上述的培养基中，在37℃，5%CO₂的条件下进行培养。

进一步地，接种的牙周膜干细胞为传代培养至P3-P5代细胞。

进一步地，所述牙周膜干细胞的接种密度为1-2×10⁴个/mL。

进一步地，在培养过程中每两天更换一次培养基。