[发明专利]一种巨噬细胞的CRISPR/Cas9表观编辑系统、方法、编辑后的巨噬细胞和应用

权利要求书

1.一种巨噬细胞的CRISPR/Cas9表观编辑系统，其特征在于，所述系统包括以下组分：PCP-EZH2、sgRNA-X-PP7和dCas9；所述PCP-EZH2为PCP基因和EZH2基因的融合基因，所述PCP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述EZH2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述sgRNA-X-PP7为用于插入sgRNA的含PP7适配子茎环的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述dCas9的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种靶向巨噬细胞特定基因的CRISPR/Cas9表观编辑系统，其特征在于，所述系统包括以下组分：PCP-EZH2、sgRNA-PP7和dCas9；所述PCP-EZH2为PCP基因和EZH2基因的融合基因，所述PCP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述EZH2基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示；所述sgRNA-PP7为插入能靶向巨噬细胞特定基因的sgRNA的含PP7适配子茎环的基因，还未插入靶向巨噬细胞特定基因的sgRNA的含PP7适配子茎环的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述dCas9的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一种靶向巨噬细胞HIF1α启动子区的CRISPR/Cas9表观编辑系统，其特征在于，所述系统包括以下组分：PCP-EZH2、sgRNA-HIF1α-PP7和dCas9；所述PCP-EZH2为PCP基因和EZH2基因的融合基因，所述PCP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述EZH2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述sgRNA-HIF1α-PP7为插入了靶向巨噬细胞HIF1α的sgRNA的含PP7适配子茎环的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述dCas9的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

4.基于权利要求1～3任一项所述系统的巨噬细胞的CRISPR/Cas9表观编辑载体系统，所述载体系统包括：sgRNA-X-PP7表达载体或sgRNA-PP7表达载体或sgRNA-HIF1α-PP7表达载体和PCP-EZH2表达载体、dCas9表达载体。

5.基于权利要求4所述载体系统的巨噬细胞的编辑方法，包括以下步骤：将sgRNA-X-PP7表达载体或sgRNA-PP7表达载体或sgRNA-HIF1α-PP7表达载体和PCP-EZH2表达载体、dCas9表达载体转染到巨噬细胞中。

6.利用权利要求5所述编辑方法制备得到的巨噬细胞。

7.权利要求1～3任一项所述系统或权利要求4所述载体系统在制备促进巨噬细胞向M1极化和/或增强巨噬细胞吞噬能力和/或恢复巨噬细胞杀伤肿瘤能力的药物中的应用。

8.权利要求1～3任一项所述系统或权利要求4所述载体系统或权利要求6所述巨噬细胞在制备抗肿瘤药物中的应用。

9.权利要求1～3任一项所述系统或权利要求4所述载体系统或权利要求6所述巨噬细胞在制备抑制肿瘤生长和/或减少肿瘤血管生成的药物中的应用。

10.权利要求1～3任一项所述系统或权利要求4所述载体系统或权利要求6所述巨噬细胞在制备解除肿瘤免疫抑制和/或促进免疫细胞对肿瘤的杀伤作用的药物中的应用。