[发明专利]一种VEGF抗体、重组AAV病毒及其应用

说明书

本发明提供一种VEGF抗体，所述抗体由人血清白蛋白信号肽Alb sp、重链、P2A连接子、人血清白蛋白信号肽Alb sp2、轻链依次串联；本发明还提供重组AAV病毒、以及上述VEGF抗体在抑制VEGF介导的内皮细胞增殖药物中的应用。本发明所述氨基酸和密码子优化后的VEGF抗体，其产生的抗体浓度更高，抑制人脐静脉内皮细胞的增殖效果高于另外两种对照VEGF抗体。

技术领域

本发明涉及一种VEGF抗体、重组AAV病毒及抑制VEGF介导的内皮细胞增殖药物中的应用，属于生物医药技术领域。

背景技术

年龄相关性黄斑变性（Age-related Macular Degeneration, AMD）是一种主要由遗传和环境因素导致、与年龄相关的黄斑退行性疾病，是发达国家55岁以上人群致盲的首要因素，在我国发病率也逐年提高，已接近白种人群发病率。AMD分为湿性（新生血管性）和干性（无新生血管性）两种类型，以脉络膜上有或无新生血管为主要区别。目前湿性AMD的治疗主要是针对脉络膜新生血管（Choroidal Neo-Vascularization, CNV），治疗方式包括手术切除新生血管、光动力疗法（PhotoDynamic Therapy, PDT）及抗血管内皮生长因子（anti-Vascular Endothelial Growth Factor, anti-VEGF）药物治疗；干性AMD目前尚无有效治疗方法，虽然有研究表明早期可以通过抗氧化治疗(补充维生素C、E、β胡萝卜素和锌)延缓疾病进程。

针对抗血管内皮生长因子的药物主要有雷珠单抗、兰尼单抗以及包含VEGF抗体的腺相关病毒等。由于单克隆抗体单次注射发挥的作用有限，腺相关病毒具有可以连续提供蛋白质疗法的优点，使得AAV-VEGF的研究呈现火爆形式。CN104994882A利用腺相关病毒表达的是VEGF的抑制物Fms-相关酪氨酸激酶-1（sFLT-1）蛋白，对VEGF抗体涉及较少。CN111770999A中利用腺相关病毒表达VEGF相关抗体，对腺相关病毒进行了结构改造，以高效率靶向期望的视网膜细胞。US20200338146A1专利中也是对腺相关病毒进行结构改造，提高靶向视网膜细胞的效率。

现有技术中主要对腺相关病毒进行了改造，使其更有利于AMD疾病的治疗，对VEGF抗体的氨基酸序列也进行了部分优化，但主要表达的是VEGF的Fab段，很少使用整个抗体结构。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供一种VEGF抗体、重组AAV病毒及其在抑制VEGF介导的内皮细胞增殖药物中的应用，实现以下发明目的：优化VEGF的抗体序列，提高其表达的VEGF抗体浓度；抑制人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的增殖。

为解决上述技术问题，本发明采取以下技术方案：

一种VEGF抗体，所述抗体由人血清白蛋白信号肽Alb sp、重链、P2A连接子、人血清白蛋白信号肽Alb sp2、轻链依次串联。

以下是对上述技术方案的进一步改进：

所述重链的氨基酸序列为序列表中SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列；所述轻链的氨基酸序列为序列表中SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列。

所述P2A连接子由furin酶切位点RKRR和P2A蛋白组成；所述P2A蛋白的氨基酸序列为序列表中SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。

所述人血清白蛋白信号肽Alb sp的氨基酸序列为序列表中SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，所述人血清白蛋白信号肽Alb sp2的氨基酸序列与Alb sp的氨基酸序列相比，缺少最开始的甲硫氨酸。

所述人血清白蛋白信号肽Alb sp的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；所述重链的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，所述轻链的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列，所述P2A蛋白的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。