[发明专利]一种Bst DNA聚合酶电致化学发光测定方法

说明书

本发明是一种Bst DNA聚合酶电致化学发光测定方法，选用MPL‑E型电致化学发光分析系统和三电极系统，对Ru(bpy)₃²⁺和Ru(bpy)₃²⁺‑Bst DNA聚合酶体系进行检测。在使用石墨烯分散液用量为3μL修饰的玻碳电极、PH值为7.5、过硫酸钾浓度为0.1mol/L的环境下检测最优。本发明操作简单、重现性好、灵敏度高。

技术领域

本发明涉及Bst DNA聚合酶，尤指一种Bst DNA聚合酶电致化学发光测定方法。

背景技术

Bst DNA聚合酶是来源于嗜热脂肪芽孢杆菌DNA聚合酶的一部分，具有5’-3’DNA聚合酶活性，但不具有5’-3’外切核酸酶活性。与其他DNA聚合酶相比Bst DNA聚合酶具有较强的热稳定性、链置换活性及聚合酶活性。电致化学发光也称电化学发光，是通过电化学的方法在电极表面产生一些特殊的物质，这些物质之间或与体系中其它组分之间通过电子传递形成激发态，由激发态返回到基态产生发光现象，是电化学与化学发光方法的结合。在用电化学与化学发光方法测定Bst DNA聚合酶时，操作过程较复杂，且系统反应慢灵敏度低，需要一种高灵敏、高选择、快速的Bst DNA聚合酶测定新方法。

发明内容

本发明的主要目的，在于提供一种电致化学发光分析系统测定Bst DNA聚合酶的方法。

为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案在于：一种Bst DNA聚合酶电致化学发光测定方法，选用MPL-E型电致化学发光分析系统和三电极系统，对Ru(bpy)₃²⁺和Ru(bpy)₃²⁺-Bst DNA聚合酶体系进行检测。

进一步，三电极系统包括：工作电极、对电极和参比电极。

进一步，工作电极为在裸电极表面涂覆修饰液的玻碳电极。

进一步，裸电极的预处理方法为，依次用0.3μm和0.5μm的氧化铝粉末抛光成镜面，用超纯水和乙醇交替清洗，用N₂吹干，作为待修饰的裸电极。

进一步，修饰液的制作方法为，称取1mg多石墨烯均匀分散于1.0mL含有0.05％Nafion的乙醇溶液中。

进一步，玻碳电极的制作方法，量取3μL的0.5mg/mL的修饰液，滴涂于处理好的裸电极表面进行修饰，并晾干。

进一步，乙醇溶液包括乙醇和超纯水且比例为1:4。

进一步，对电极为铂丝电极。

进一步，参比电极为饱和氯化银电极。

本发明的有益效果为：

Ru(bpy)₃²⁺的优点为，在形成激发态时，光子的发射使Ru(bpy)₃²⁺在电极表面附近的基态再生，使单个Ru(bpy)₃²⁺分子可参与多个电致化学反应，增加了系统的灵敏度，同时降低了检测限。

石墨烯具有高表面积、超高电子迁移率和优异的导热性。具有优异的生物相容性，可以直接分散在水溶液中而无需改性，能够建立一种操作简单、灵敏度高、准确性好的BstDNA聚合酶的测定。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

图1为裸电极和玻碳电极对电极强度影响的关系图；

图2为电极强度与石墨烯分散液用量之间关系图；

图3为电极强度与PH值之间关系图；