[发明专利]分子标志物SLC22A3的定量检测方法和应用

说明书

本发明涉及一种SLC22A3基因的检测物在制备白血病辅助诊断、治疗疗效或者预后判断试剂或药物的应用，所述SLC22A3基因如SEQ ID NO.1所示，所述检测物包括如SEQID NO.2所示的正向引物和如SEQ ID NO.3所示的反向引物。本发明用于检测白血病的方法是基于基因标志物SLC22A3表达及甲基化的水平，与其他临床指标相结合，为白血病的诊断、治疗与预后提供更准确的判断。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及分子标记物的检测方法及应用。

背景技术

急性髓细胞性白血病(AML)是起源于髓系祖细胞的一类造血系统恶性疾病，其发病涉及细胞分化、增殖、凋亡等多方面的异常改变，非随机性染色体异常、癌基因和抑癌基因突变等在AML发生发展过程中起着重要作用。因AML异质性大，临床上亟需标准化治疗基础上的基于患者生物学特性的个体化精准诊疗方案。近年来研究发现，涉及甲基化调控、组蛋白修饰、RNA剪切等的表观遗传学(epigenetics)改变是白血病发生过程中发挥重要作用的又一病理机制，且去甲基化药物在AML治疗中疗效较好。研究表明，DNA甲基化与AML的发生、发展密切相关，可以作为有效的分子标志物应用于AML的辅助诊断、预后判断和疾病监测，并为AML分子靶向治疗提供更多可能。临床上期待发现更多特异而敏感的DNA甲基化修饰，并将其运用于AML的临床诊疗。

SLC22A3是溶质载体家族成员，编码一种血浆整合膜蛋白，对于消除内源性有机小阳离子以及各种药物和环境毒素至关重要。SLC22A3启动子区域含有一个较大的CpG岛，通过甲基化测序和数据库分析发现SLC22A3在AML中发生高甲基化改变，提示SLC22A3可能在AML的发生、发展中起重要作用。目前尚无在AML中检测SLC22A3基因表达和甲基化的方案，SLC22A3对白血病的意义也亟待发现。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提出基于定量PCR检测人SLC22A3表达水平及启动子甲基化水平的方法，以此作为急性髓系白血病患者的生物标志物，为临床上急性髓系白血病患者的早期发现、治疗疗效及预后判断提供支持。

为了实现发明目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明第一方面提供一种SLC22A3基因的检测物在制备白血病辅助诊断、治疗疗效或者预后判断试剂或药物的应用。

进一步地，所述SLC22A3基因如SEQ ID NO.1所示。

进一步地，所述检测物包括如SEQ ID NO.2所示的正向引物和如SEQ ID NO.3所示的反向引物。

进一步地，所述检测物还包括如SEQ ID NO.6-7和SEQ ID NO.8-9所示的SLC22A3甲基化和未甲基化特异性引物。

进一步地，所述试剂为定量PCR检测试剂。

进一步地，所述白血病为急性髓系白血病。

本发明的第二方面提供一种白血病中检测SLC22A3基因表达和甲基化的检测物，包括检测SLC22A3基因表达的一条正向引物和一条反向引物，检测SLC22A3甲基化的一条上游引物和一条下游引物，以及检测SLC22A3未甲基化的一条上游引物和一条下游引物，所述SLC22A3基因序列如SEQ ID NO.1所示，针对SLC22A3表达的引物序列如SEQ ID NO.2-3所示，针对SLC22A3甲基化的引物序列如SEQ ID NO.6-7所示，针对SLC22A3未甲基化的引物序列如SEQ ID NO.8-9所示。

进一步地，所述检测物还包括内参ABL1引物和内参ALU引物，所述内参ABL1的正向引物如SEQ ID NO.4所示，反向引物如SEQ ID NO.5所示，所述内参ALU引物的正向引物如SEQ ID NO.10所示，反向引物如SEQ ID NO.11所示。

进一步地，所述白血病为急性髓系白血病。