[发明专利]一种青蒿素抗疟作用靶基因的筛选方法

权利要求书

1.一种青蒿素抗疟作用靶基因的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

建立疟原虫感染红细胞不同时期虫体对青蒿素作用不同时间的反应效果的单细胞测序后的降维展示的UMAP图；

将候选疟原虫基因定位于UMAP图，根据其定位，推测其作为青蒿素靶基因的可能性；

如果其分布与感染18小时虫体分布达到90％以上重叠，不包括90％，可推测其作为青蒿素靶基因的可能性较大，

如果其分布与感染18小时的虫体分布区有60-90％重叠，包括60％以及90％，则推测其可能存在一定靶向关系，但较弱，作为青蒿素靶基因；

如果其分布与感染18小时虫体分布60％以下重叠，不包括60％，则推定认为该候选疟原虫基因与青蒿素没有靶向关系，不能作为青蒿素靶基因；

所述可能性较大是指其作为青蒿素靶基因的概率大于60％；

所述可能存在一定靶向关系，但较弱是指候选疟原虫基因作为青蒿素靶基因的概率为1％-60％之间；

该候选疟原虫基因与青蒿素没有靶向关系是指选疟原虫基因作为青蒿素靶基因的概率小于1％。

2.根据权利要求1所述的一种青蒿素抗疟作用靶基因的筛选方法，其特征在于，所述建立疟原虫感染红细胞6h、12h、18h、24h、36h和42h不同时期虫体对青蒿素作用不同时间0h、3h、9h和24h的反应效果的单细胞测序后的降维展示的UMAP图。

3.根据权利要求1所述的一种青蒿素抗疟作用靶基因的筛选方法，其特征在于，建立疟原虫感染红细胞不同时期虫体对青蒿素作用不同时间的反应效果的单细胞测序后的降维展示的UMAP图的方法包括以下步骤：

1)疟原虫感染小鼠模型建立；

2)在疟原虫感染小鼠的虫体收获期收获虫体：

3)利用流式分选仪分选纯化疟原虫；

4)单细胞测序分析；

5)各期marker genes的选择参见下表：

对于疟原虫Plasmodium yoelii，选用表1各感染期对映的标记基因，对于其它疟原虫种类，可通过此表找出对应同源基因即可；

6)根据分析结果，做出UMAP图。

4.根据权利要求3所述的一种青蒿素抗疟作用靶基因的筛选方法，其特征在于，步骤1)中疟原虫感染小鼠模型建立的方式包括：

利用带荧光标记的疟原虫株感染小鼠；或，

用不带荧光标记疟原虫感染小鼠，通过荧光染料染色后，利用流式分选仪分选纯化疟原虫。

5.根据权利要求3所述的一种青蒿素抗疟作用靶基因的筛选方法，其特征在于，步骤2)中在疟原虫感染小鼠的虫体收获期收获虫体包括：(1)疟原虫早期较多的混合群；(2)疟原虫发育后期较多的混合群；(3)疟原虫发育早期和疟原虫发育后期虫体数量相当的混合群。

6.根据权利要求3所述的一种青蒿素抗疟作用靶基因的筛选方法，其特征在于，步骤3)中利用流式分选仪分选纯化疟原虫的过程中，收获细胞时，收集液中要保持一定量的胎牛血清。

7.根据权利要求6所述的一种青蒿素抗疟作用靶基因的筛选方法，其特征在于，步骤3)中利用流式分选仪分选纯化疟原虫的过程中，收获细胞时，保证血清终浓度在10％以下。