[发明专利]黄病毒科检测用多位点重组抗原的制备方法

说明书

本发明涉及黄病毒科检测用多位点重组抗原的制备方法，包括以下步骤：本发明通过蛋白序列比对的方法挑选出5段蛋白的具有极强的抗原决定基，采用基因克隆技术将该基因片段转入pET32质粒载体中再导入BL21(D3)菌株中，利用IPTG为诱导剂，促使细菌大量表达目标蛋白，在经过GSH树脂进行纯化即得。该重组抗原可以特异性的识别黄病毒科病毒的血清种的抗体，同时由于拥有5个不同蛋白的片段，极大的提高其灵敏度和特异性，是黄病毒科病毒抗体的最佳候选抗原。

技术领域

本发明属于抗原制备领域，具体涉及一种黄病毒科检测用多位点重组抗原的制备方法。

背景技术

黄病毒科是一科有包膜、球状、基因组为单分子线状正链ssRNA的依靠虫媒动物进行传播的病毒，在世界范围内普遍存在。其病理上可以分成3个病毒属，即黄病毒属(flavivirus)、瘟病毒属(pestivirus)和丙型肝炎病毒属(hepacivirus)，总共包含有70多种病毒，主要包括登革热病毒，流行性乙型脑炎病毒和森林脑炎病毒等。其中，以登革热病毒为例，感染后的患者会出现高热，头痛，肌肉、骨关节剧烈酸痛、部分患者出现皮疹、出血倾向、淋巴结肿大、白细胞计数减少、血小板减少等症状，并有可能造成患者的死亡。因此快速的对病原进行检测并得出结果，可以更好的对患者进行诊断，从而达到更有效治疗。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种黄病毒科检测用多位点重组抗原的制备方法，其中，包括以下步骤：本项发明是通过蛋白序列比对的方法(ProPred网上预测软件：https://webs.iiitd.edu.in/raghava/propred/；cluster X序列对比软件；蛋白可溶性预测Protscale：https://web.expasy.org/protscale/)，挑选出5段蛋白的具有极强的抗原决定基，是重要的免疫激活感染体产生抗体的重要蛋白片段，感染体会优先释放相应的抗体，且特异性强，同时蛋白片段溶水强。同时利用GSSSG链接肽链形成了拥有多位点的具有免疫原性特异性强的抗原蛋白。该重组蛋白区别于其他单一蛋白序列，融合了黄病毒科蛋白的5段基础蛋白的的片段，串联在了一起，本发明采用基因克隆技术将该基因片段转入pET32质粒载体中再导入BL21(D3)菌株中，利用IPTG为诱导剂，促使细菌大量表达目标蛋白，在经过GSH树脂进行纯化即得。