[发明专利]一种病毒核酸提取裂解液、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种基于磁珠的病毒核酸提取方法及试剂盒，所述提取方法包括以下步骤：将生物样本和裂解液混匀后得到裂解反应体系；所述裂解反应体系进行反应，反应结束后通过磁珠吸附核酸，得到吸附有核酸的磁珠；将获得的吸附有核酸的磁珠洗涤后进行核酸洗脱，获得生物样本核酸；其中，所述裂解液中含有离液剂、金属螯合剂、钠离子、非离子型表面活性剂和聚乙二醇。本发明提供的基于磁珠法的病毒核酸提取方法，在释放核酸的过程中，不需要蛋白酶K、以及PolyA溶液，极大限度较少因为操作引起的污染。提取方法操作方便、简单，可大幅降低人工成本和时间成本，适合高通量提取。

技术领域

本发明属于病毒核酸提取领域，更具体地，涉及一种组织样本病毒核酸提取裂解液、试剂盒及方法。

背景技术

随着分子生物学的发展，对疾病相关病毒进行检测和分型是分子检测的一个重要应用领域，而从生物材料中高效、简便的提取纯化目的核酸是分子检测的关键技术。

目前病毒核酸提取方法有酚-氯仿法、煮沸法、离心柱提取试剂盒、磁珠法提取试剂盒。

其中酚-氯仿法虽然对蛋白抽提较彻底，但是操作过程复杂，在反复的抽提震荡过程中对DNA链有一定的机械损伤，使其发生降解，其使用的酚为商品酚，易被氧化产生酚的氧化物如醌、二酸等，可破坏核酸的二脂键并引起DNA链的交联，进而影响PCR反应，且在DNA溶液中残留的酚类等有机物对DNA聚合酶有抑制作用，抑制PCR扩增反应，降低扩增效率；煮沸法提取产物蛋白等杂质残留过多、质量较差，而且高温可能使部分DNA链断裂成小片段。相比之下，试剂盒不仅有蛋白酶消化的步骤而且减少了酚-氯仿抽提过程中造成的机械损伤，较彻底地出去了蛋白质杂质，提取的DNA效果相对较好。

但是其需要新鲜添加蛋白酶K使膜蛋白、组蛋白降解，使核酸充分游离；另外还需要添加Poly A溶液，以上操作步骤易造成污染以及气溶胶的产生。

发明内容

针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种基于磁珠的病毒核酸提取方法及试剂盒，由此解决现有技术中病毒核酸提取需要使用蛋白酶K以及Poly A溶液易造成污染以及气溶胶的产生的技术问题。

为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种病毒核酸提取裂解液，其特征在于，含有3.5-6mol/L的异硫氰酸胍。

优选地，所述病毒核酸提取裂解液，其含有1％-20％PEG-8000。

优选地，所述病毒核酸提取裂解液，其含有5-100mmol/L金属螯合剂、100-500mmol/L钠离子、1-10wt％非离子型表面活性剂、1-20wt％聚乙二醇、5-100mmol/L Tris。

优选地，所述病毒核酸提取裂解液，其所述裂解液的pH值为7-8，优选地，所述裂解液的pH值为8。

按照本发明的另一个方面，提供了一种病毒核酸提取试剂盒，其包括本发明提供的裂解液，优选包括洗涤液、以及洗脱液。

优选地，所述病毒核酸提取试剂盒，其所述洗涤液pH值为7-8，其中含有60-80wt％酒精0.1-0.5mol/L NaCl。

优选地，所述病毒核酸提取试剂盒，其所述洗涤液为为分散有5-200mg/mL用于核酸提取磁珠的磁珠-洗涤混合液。

按照本发明的另一个方面，提供了一种基于磁珠的病毒核酸提取方法，其包括以下步骤：

将含有病毒的生物样本和本发明提供的裂解液混匀后得到裂解反应体系；

所述裂解反应体系进行反应，反应结束后通过磁珠吸附核酸，得到吸附有核酸的磁珠；

将获得的吸附有核酸的磁珠洗涤后进行核酸洗脱，获得病毒核酸。