[发明专利]鉴别布鲁氏菌S2疫苗株与野毒株的引物组、探针及其应用

说明书

本发明公开了一种鉴别布鲁氏菌S2疫苗株与野毒株的引物组、探针及其应用，涉及细菌检测技术领域。本发明提供了包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物的引物组和核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的探针，能够快速准确鉴别布鲁氏菌S2疫苗株与野毒株。本发明还提供了利用所述引物组和探针鉴别布鲁氏菌S2疫苗株与野毒株的方法，该方法灵敏度高，特异性好，适合临床应用。本发明为防治筛查布鲁氏菌病提供了有效的新工具，大大提升了布病防治工作的效率，适合大规模推广实施，具有巨大的应用潜力和潜在商业价值。

技术领域

本发明涉及细菌检测技术领域，特别是涉及鉴别布鲁氏菌S2疫苗株与野毒株的引物组、探针及其应用。

背景技术

布鲁氏菌病(又称布鲁氏病)是由布鲁氏菌(Brucella)引起的一种人畜共患传染病。布鲁氏菌是一种革兰氏染色呈阴性的兼性厌氧菌，根据致病性和宿主选择性的差异，可将其分为至少10个种，其中以羊种布鲁氏菌(Brucella melitensis)、牛种布鲁氏菌(Brucella abortus)和猪种布鲁氏菌(Brucella suis)的感染性最强。

布鲁氏菌病对畜牧业危害极大，其流行致使疫区肉、奶等产品存在严重的安全隐患，极大地影响牛、羊、猪等动物产品的对外贸易，并严重威胁人类的健康。目前针对布鲁氏病的防疫措施主要以疫苗预防为主，常见的布鲁氏菌病活疫苗品种主要有牛种布鲁氏菌A19(S19)株、猪种布鲁氏菌S2株、羊种布鲁氏菌M5株和M5-90株等。

《国家布鲁氏菌病防治计划(2016—2020年)》对布鲁氏菌病防治实行区域化管理，其中一类地区(15个省份和新疆生产建设兵团)采取以免疫接种为主的防控策略。而针对一类地区疫苗免疫对野毒感染检测的干扰，建立一种鉴别疫苗株与野毒株的检测方法具有非常重要的意义。目前已报道的鉴别检测疫苗株S2与野毒株的方法有基于疫苗株S2缺失的25bp碱基而建立的双重荧光PCR方法(Nan W,Tan P,Wang Y,Xu Z,Mao K,Peng D,ChenY.Duplex PCR for differentiation of the vaccine strain Brucella suis S2andB.suis biovar 1from other strains of Brucella spp.Vet J.2014Sep；201(3):427-8.doi:10.1016/j.tvjl.2014.05.033.Epub 2014May 27.PMID:25011712；谭鹏飞.基于PCR方法布鲁菌疫苗株与野生菌株鉴别诊断方法的建立[D].扬州大学,2012.)。但该方法需要双探针检测，检测分型成本较高，目前急需一种检测成本较低，更加简便的分型检测方法。

发明内容

本发明的目的是提供鉴别布鲁氏菌S2疫苗株与野毒株的引物组、探针及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，实现布鲁氏菌S2疫苗株与野毒株的快速区分。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

技术方案之一，提供了一组鉴别布鲁氏菌S2疫苗株与野毒株的引物组和探针，所述引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物，所述探针核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

在优选的实施方案中，所述探针核苷酸序列5’端连接荧光基团，3’端连接淬灭基团。

在优选的实施方案中，所述探针核苷酸序列5’端连接荧光基团为FAM、HEX、VIC、CY5、TET中的一种；所述探针核苷酸序列3’端连接淬灭基团选自BHQ和TAMRA系列中的一种。

技术方案之二，提供了一种鉴别布鲁氏菌S2疫苗株与野毒株的试剂盒，所述试剂盒中包括所述的引物组和探针。

在优选的实施方案中，所述的试剂盒中还包括布鲁氏菌S2疫苗株阳性对照品与布鲁氏菌野毒株阳性对照品。