[发明专利]一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的添加剂

权利要求书

1.一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的添加剂，其特征在于：所述添加剂包括JNK抑制剂、hedgehog通路拮抗剂、EGF信号因子、FGF信号因子、TGF-β抑制剂、WNT信号通路激活剂、Notch信号通路抑制剂、小分子化合物和微量元素，所述添加剂在细胞培养的不同阶段的配比不同。

2.根据权利要求1所述的一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的添加剂，其特征在于：所述JNK抑制剂为CC-930，hedgehog通路拮抗剂为N-乙酰半胱氨酸或环巴胺，EGF信号因子为EGF，FGF信号因子为FGF10，TGF-β超家族因子为ActivinA，TGF-β抑制剂为ALK5iII，WNT信号通路激活剂为BML-284或WNT3a，Notch信号通路抑制剂为FLI-06或DAPT。

3.根据权利要求1所述的一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的添加剂，其特征在于：所述小分子化合物包括角蛋白生长因子、蛋白激酶C激活剂、ROCK1抑制剂、Sirt1抑制剂、C-Met抑制剂、甲状腺激素和视黄酸(RetinoicAcid)。

4.根据权利要求3所述的一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的添加剂，其特征在于：所述角蛋白生长因子为KGF，蛋白激酶C激活剂为TPB，ROCK1抑制剂为Y27632，Sirt1抑制剂为Nicotinamide，C-Met抑制剂为BMS-777607，甲状腺激素为T3。

5.根据权利要求1所述的一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的添加剂，其特征在于：还包括ALK4/5/7抑制剂、CDK5抑制剂、L型钙离子通道(LTCC)激活剂和Hippo信号通路效应器抑制剂，所述ALK4/5/7抑制剂为A83-01、CDK5抑制剂为AT7519、L型钙离子通道(LTCC)激活剂为BayK8644、Hippo信号通路效应器抑制剂为Super-TDU1-31。

6.根据权利要求1所述的一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的添加剂，其特征在于：所述添加剂在细胞培养的不同阶段的配比不同，具体可分为添加剂A、添加剂B、添加剂C和添加剂D，所述添加剂A用于诱导多功能细胞球分化为定型内胚层细胞阶段，所述添加剂B用于定型内胚层细胞分化为胰腺前体细胞阶段，所述添加剂C用于胰腺前体细胞分化为胰腺内分泌祖细胞阶段，所述添加剂D用于胰腺内分泌祖细胞分化为胰岛β细胞阶段。

7.根据权利要求6所述的一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的添加剂，其特征在于：所述添加剂A包括TGF-β因子、WNT信号通路激活剂和JNK信号抑制剂，其中TGF-β因子的浓度为30-100ng/mL；WNT信号通路激活剂的浓度为1-5μM；JNK信号抑制剂浓度为0.5-5μM。

8.根据权利要求6所述的一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的添加剂，其特征在于：所述添加剂B包括EGF信号因子、视黄酸、角蛋白生长因子、蛋白激酶C激活剂和Sirt1抑制剂，其中EGF信号因子的浓度为2-20ng/mL；视黄酸(RetinoicAcid)的浓度为1-5μM；角蛋白生长因子的浓度为20-40ng/mL；蛋白激酶C激活剂的浓度为100-300nM；Sirt1抑制剂的浓度为10-40μM。

9.根据权利要求6所述的一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的添加剂，其特征在于：所述添加剂C包括TGF-β抑制剂、hedgehog信号通路抑制剂、Notch信号通路抑制剂、FGF信号因子和甲状腺激素；其中TGF-β抑制剂的浓度为5-20μM；hedgehog信号通路抑制剂的浓度为10-50ng/mL；Notch信号通路抑制剂的浓度为0.2-1μM；FGF信号因子浓度为5-50ng/ml；甲状腺激素的浓度为0.1-1μM。