[发明专利]一种用“Western Blot”法快速检测早期阿尔茨海默病的应用

说明书

本发明涉及体外检测技术领域，特别涉及一种用“Western Blot”法快速检测早期阿尔茨海默病的应用。其包括用被检测者口腔咽喉部分泌物为待测样本，所述待测样本与特异性抗体相结合后，用酶对特异性抗体进行标记，通过滴加与酶反应的显色底物后，观察是否显色来判断检测结果的检测方法。本发明首次利用Western Blot法来对早期阿尔茨海默病进行检测，不仅实现了真正意义上阿尔茨海默病的早期检测，且简单便捷，特异性高，检测准确率高，更易于推广。

技术领域

本发明涉及体外检测技术领域，特别涉及一种用“Western Blot”法快速检测早期阿尔茨海默病的应用。

背景技术

阿尔茨海默病(AD)是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。临床上以记忆障碍、失语、失用、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等全面性痴呆表现为特征，病因迄今未明。随着世界人口的老龄化，AD的发病率也在逐年上升，已成为继心脑血管疾病和肿瘤后第三大危及人类生命健康的疾病。阿尔茨海默症是一种与年龄相关的疾病，患病概率极高，我国65岁的老年人患病概率为5％左右；到85岁，患病概率高达40％。世界各地的研究人员正在开发新的诊断方法，可让人们能够在症状还很轻微或者症状出现之前检测出来，以达到早发现早干预的目的。

现有的阿尔茨海默病的检测方法有以下几种：(1).实验室检查。血、尿常规、血生化检查；(2).脑电图，阿尔茨海默病的早期脑电图改变主要是波幅降低和节律减慢；(3).影像学，CT检查见脑萎缩、脑室扩大，头颅磁共振检查显示双侧颞叶、海马萎缩情况；(4).神经心理学检查，对阿尔茨海默病的认知进行评估，评估领域包括记忆功能、语言功能、定向力、运用能力、注意力、知觉和执行功能等七个领域；(5).基因检查，对有明确家族史的患者可以进行基因检测；(6).采用免疫结合反应的原理来检测阿尔茨海默病，且在阿尔茨海默病中的价值越来越受到广泛的关注。

目前，采用免疫结合反应的原理来检测阿尔茨海默病的方法有酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay，简写ELISA)、PCR法、免疫组化法等。其中，应用较多的为ELISA法，其是指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。上述方法主要是针对已有发病症状的被检测者进行检测，而不能针对未发病的被检测者进行检测。因为，上述方法均采用检测抗体的方式进行检测被检测者是否患有阿尔茨海默病。众所周知，当体内产生特异性抗体时，说明抗原已经在体内存在至少一个月的时间了，也就是说，该被检测者已经患有阿尔茨海默病，那么就表现出症状，所以说上述方法是针对已有发病症状的被检测者进行检测的。那么，也就是不属于早期诊断，而属于中晚期诊断，与早期诊断相比会耽误最佳干预时机。

如专利CN 111175277 A，公开了一种用于检测阿尔兹海默病生物标记物的检测试剂、试剂盒、制备方法和检测方法，其采用抗原-抗体-二抗酶的模式进行检测。再如专利CN107907676A，其公开了一种阿尔茨海默相关神经丝蛋白检测试剂盒及其制备方法，其试剂盒，设有试纸卡，所述试纸卡设有由下自上依次设有：PVC板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中结合垫上吸附有稀土荧光微球标记的阿尔茨海默相关神经丝蛋白单克隆抗体，所述稀土荧光微球的直径为60-120nm，稀土荧光微球掺杂稀土镧系元素，在基态下稳定，在340-380nm的激发光源作用下发射出波长范围在540-600nm的荧光；所述单克隆抗体为纯化后混合的单克隆抗体，来源于针对2-6个不同的阿尔茨海默相关神经丝蛋白抗原表位的单克隆抗体细胞株。该专利采用了酶联免疫吸附测定(ELISA)法中的(抗体-抗原-抗体酶)模式进行检测，虽然在一定程度上可达到早期诊断的目的，但是其还存在以下缺点：一是，虽然采用ELISA法检测灵敏度高，但是如果抗体有非特异性结合，那么检测结果准确性将会受到影响。二是，待测样本多采用血清、血浆等，需要进行创伤性采集，对人体伤害相对较大。虽然该专利中采用了无创伤便可采集的尿液，但是采用尿液作为样本，尿液需要等待24小时后才可用于检测，从时间上来讲，检测时间较长。