[发明专利]一种利用槐耳、槐耳及云芝发酵培养制备甲酰苯胺类化合物的方法及应用

权利要求书

1.一种利用槐耳、云芝发酵共培养制备甲酰苯胺类化合物的方法，其特征在于，所述甲酰苯胺类化合物的结构式如式I、式II所示；

其中，式I、式II所示化合物的具体制备步骤如下：

S1，将槐耳、云芝分别接种至固体平面培养基上，培养6-8天；

S2，取部分步骤S1中培养得到的槐耳及云芝，将其分别接种至装有培养基的培养容器中，分别发酵培养6-8天；

S3，将步骤S2中发酵培养得到的槐耳培养液及云芝培养液进行混合，去除部分上清液，再进行发酵共培养12-14天；

S4，采用有机溶剂提取步骤S3发酵培养得到的发酵混合液；

S5，对步骤S4中得到的粗提取物，进行分离纯化得到式I、式II所示化合物。

2.根据权利要求1所述的利用槐耳、云芝发酵共培养制备甲酰苯胺类化合物的方法，其特征在于，步骤S2中，所述槐耳和云芝的接种比例为1∶0.5～1∶1.5。

3.根据权利要求2所述的利用槐耳、云芝发酵共培养制备甲酰苯胺类化合物的方法，其特征在于，步骤S2中所述的培养基由以下质量含量的组份组成：甘露醇18.0～22.0g/L，味精8.0～12.0g/L，麦芽糖18.0～22.0g/L，酵母膏2.0～4.0g/L，葡萄糖8.0～12.0g/L，蛋白胨4.0～6.0g/L，MgSO₄·7H₂O 0.2～0.4g/L，KH₂PO₄ 0.4～0.6g/L，余量为水。

4.根据权利要求3所述的利用槐耳、云芝发酵共培养制备甲酰苯胺类化合物的方法，其特征在于，步骤S2中所述的培养基由以下质量含量的组份组成：甘露醇20.0g/L，味精10.0g/L，麦芽糖20.0g/L，酵母膏3.0g/L，葡萄糖10.0g/L，蛋白胨5.0g/L，MgSO₄·7H₂O0.3g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，余量为水。

5.根据权利要求2所述的利用槐耳、云芝发酵共培养制备甲酰苯胺类化合物的方法，其特征在于，步骤S2中，所述槐耳和云芝的接种比例为1∶1。

6.根据权利要求1所述的利用槐耳、云芝发酵共培养制备甲酰苯胺类化合物的方法，其特征在于，步骤S2中，槐耳、云芝单独发酵培养的温度为26～28℃，所述槐耳、云芝单独发酵培养可在摇床上进行，摇床的转速为180～200rpm；步骤S3中，槐耳、云芝发酵共培养的温度为26～28℃。

7.根据权利要求1所述的利用槐耳、云芝发酵共培养制备甲酰苯胺类化合物的方法，其特征在于，步骤S5中，式I、式II所示化合物通过HPLC分离纯化得到，HPLC所用流动相为乙腈和2/1000的三氟乙酸水溶液。

8.根据权利要求7所述的利用槐耳、云芝发酵共培养制备甲酰苯胺类化合物的方法，其特征在于，采用HPLC进行分离纯化时，流动相梯度淋洗方法如下：0-2min，5％乙腈，95％三氟乙酸水溶液；2-30min，由5％乙腈，95％三氟乙酸水溶液逐渐调整至50％乙腈，50％三氟乙酸水溶液。

9.由权利要求1-8任一制备方法制备得到的式I、式II所示化合物在制备抗氧化制剂中的应用。

10.一种利用槐耳单独发酵培养制备甲酰苯胺类化合物的方法，其特征在于，所述甲酰苯胺类化合物的结构式如式I、式II所示；

其中，式I、式II所示化合物的具体制备步骤如下：

步骤(1)，将槐耳接种至固体平面培养基上，培养6-8天；

步骤(2)，取部分步骤(1)中培养得到的槐耳，将其接种至装有培养基的培养容器中，在26～28℃，发酵培养18-22天；其中，所述的培养基由以下质量含量的组份组成：甘露醇18.0～22.0g/L，味精8.0～12.0g/L，麦芽糖18.0～22.0g/L，酵母膏2.0～4.0g/L，葡萄糖8.0～12.0g/L，蛋白胨4.0～6.0g/L，MgSO₄·7H₂O 0.2～0.4g/L，KH₂PO₄ 0.4～0.6g/L，余量为水；

步骤(3)，采用有机溶剂提取步骤(2)发酵培养得到的发酵液；

步骤(4)，对步骤(3)中得到的粗提取物，通过HPLC分离纯化得到式I、式II所示化合物。