[发明专利]一种转移性肠癌类器官的培养和应用

说明书

本发明涉及生物医药技术，尤其涉及一种转移性肠癌类器官的培养和应用。本发明改良了基础培养基的组分和浓度，提高了转移性肠癌类器官培养的建立成功率、增加了转移性类器官的扩增效率，传代后增殖效率稳定，加快了药筛过程，降低了培养材料的成本。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，更具体地涉及一种转移性肠癌类器官的培养和应用。

背景技术

大肠癌是一种非常高发的消化道恶性肿瘤，在全世界肿瘤发病率中排第3，每年超过120万新发病例，死亡人数每年超60万。15％的大肠癌患者诊断时已是晚期转移(IV期)，没有很好的治疗方案和治疗药物，同时也丧失了手术机会；50％的大肠癌患者最终会进展到远处转移，包括肝，肺和骨。如何及时给予大肠癌IV期患者有效的治疗方案和治疗药物一直是临床医生孜孜追求的目标。

类器官是将具有干性潜能的细胞进行3D培养，从而形成相应器官的类似组织，类器官能最大程度地模拟体内组织结构及功能并能长期传代培养。肿瘤类器官的遗传背景与其来源肿瘤组织遗传背景又高度一致。2018年Science一项研究表明肿瘤类器官体外对药物的反应与转移性胃肠道肿瘤患者的临床预后高度一致，揭示了肿瘤类器官可以作为肿瘤病人特别是晚期肿瘤病人临床精准治疗的一种筛查工具。

大肠癌原发部位的手术样本或活检样本肿瘤类器官培养已有很高的成功率，但转移部位的穿刺样本因其样本微小，反复治疗后遗传特性改变，肿瘤微环境改变等，与原发未经治疗的样本相比，因不适应原位培养基，其肿瘤类器官培养难度较大，成功率较低。这个技术难题限制了肿瘤类器官在更需要精准治疗的晚期肿瘤病人中的临床应用。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了大肠癌转移部位穿刺样本的肿瘤类器官培养方法，培养基和类器官药物筛选方法。

1.一种改良的基础培养基，以Advance DMEM/F12和DMEM/F12培养基为基础，添加有抗坏血酸(Ascorbic acid)、转铁蛋白(优选地人源转铁蛋白(Holo-transferrin))、L-谷胱甘肽(L-Glutathine)、胰岛素(Insulin)、偏钒酸铵(Ammonium metavanadate)、四水氯化锰(Manganese chloride tetrahydrate)、亚硒酸钠(Sodium selenite)和乙醇胺盐酸盐(Ethanolamine hydrochloride)。

2.如项目1所述的改良的基础培养基，Advance DMEM/F12和DMEM/F12的体积比为(0.1-10):1，较佳地(0.5-2):1。

3.如项目1所述的改良的基础培养基，抗坏血酸的浓度为0.2-50mg/L，较佳地1-10mg/L；人源转铁蛋白的浓度为1-250mg/L，较佳地5-50mg/L；L-谷胱甘肽的浓度为0.2-50mg/L，较佳地1-10mg/L；胰岛素的浓度为0.2-100mg/L，较佳地1-20mg/L；偏钒酸铵的浓度为2×10^-5-1×10^-2mg/L，较佳地1×10^-4-2×10^-3mg/L；四水氯化锰的浓度为1×10^-5-2.5×10^-3mg/L，较佳地5×10^-5-5×10^-4mg/L；亚硒酸钠的浓度为0.0004-0.25mg/L，较佳地0.002-0.05mg/L；和/或乙醇胺盐酸盐的浓度为0.4-100mg/L，较佳地2-20mg/L，以改良的培养基总体积计。