[发明专利]一种烟草法尼基焦磷酸合酶基因及其应用

权利要求书

1.一种降低烟草叶片中植物甾醇含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、以烟草叶片的cDNA为模板，进行PCR扩增获得NtFDPS基因，核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，PCR扩增用引物序列如下：

NtFDPS-F：5’- ATGTATTTGGTACTTGCAACAAG - 3’，

NtFDPS-R：5’- CACCATCACATATACCAGCC - 3’；

S2、构建重组TRV2- NtFDPS载体，将步骤S1中的PCR扩增产物及空载体TRV2进行EcoRI、BamHI双酶切，利用T4 DNA连接酶进行连接，将连接产物转化大肠杆菌感受态DH5α，转化操作结束后将转化产物涂布在含50mg/L Kan的LB固体培养基上，37℃过夜培养，挑选阳性单菌落扩增后进一步进行PCR鉴定， 并结合测序验证，确保获得构建正确的重组载体TRV2- NtFDPS；

S3、利用农杆菌介导的VIGS技术，将所构建的重组载体TRV2- NtFDPS转化烟草植株；将TRV2-NtFDPS的阳性克隆质粒，通过电击转化方式转化进入农杆菌GV3101感受态细胞中，利用含50mg/L Kan 和50mg/L Rif的YEB平板进行培养筛选，在28℃倒置培养2d后，利用菌落PCR筛选带有目的基因的农杆菌。

2.根据权利要求1的方法，其特征在于，通过qRT-PCR对NtFDPS基因表达情况进行检测，在TRV2- NtFDPS的侵染植株中，NtFDPS的表达量显著降低，qRT-PCR引物如下：

NtFDPS-F：5’- CTCCTACTCTGAAAGAAACGAACA - 3’，

NtFDPS-R：5’- CGAGCCTCATCAGTAAACTCG- 3’。