[发明专利]高效的细胞无血清培养基体系及其细胞分泌物的应用

权利要求书

1.一种细胞完全培养基，由基础培养基、血清替代物和补充剂组成，其中：

基础培养基的用量为50～80体积份，选自MEM、F12、低糖DMEM、高糖DMEM中的至少一种；

血清替代物的用量为5～50体积份，选自KnockOut^TM DMEM、Ultra CULTURE^TM Serum-free medium、EliteGro^TM 、EliteGro^TM-Adv、Ultroser ™ G中的至少一种；

补充剂的用量为0～5体积份，选自PEN STREP GLUTAMINE、Penicillin-Streptomycin、Sodium Pyruvate、L-GlutaMax中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的细胞完全培养基，其特征在于：其组成为：

基础培养基65体积份、血清替代物33体积份、补充剂2体积份，其中：

基础培养基为DMEM basic(1X)（高糖）；

血清替代物为KnockOut^TM DMEM(1X)；

补充剂为PEN STREP GLUTAMINE；

或基础培养基75体积份、血清替代物24体积份、补充剂1体积份，其中：

基础培养基为DMEM/F12；

血清替代物为Ultra CULTURETM Serum-free medium；

补充剂为GlutaMAX™。

3.一种细胞培养方法，包括将细胞接种于细胞完全培养基内并及时更换培养基，其特征在于：所述细胞完全培养基如权利要求1或2所述。

4.根据权利要求3所述的细胞培养方法，其特征在于：所述细胞为不同来源的干细胞、成纤维细胞、癌旁组织细胞、上皮细胞、脂肪细胞、癌细胞、神经细胞、甲状腺细胞、软骨细胞、角质细胞、骨髓细胞、心肌细胞。

5.根据权利要求3所述的细胞培养方法，其特征在于：所述细胞为成纤维细胞，所述培养基的组成为：基础培养基75体积份、血清替代物24体积份、补充剂1体积份，其中：

基础培养基为DMEM/F12；

血清替代物为Ultra CULTURETM Serum-free medium；

补充剂为Penicillin-Streptomycin。

6.根据权利要求3所述的细胞培养方法，其特征在于：所述细胞为间充质干细胞，所述培养基的组成为：基础培养基65体积份、血清替代物33体积份、补充剂2体积份，其中：

基础培养基为DMEM basic(1X)（高糖）；

血清替代物为KnockOut^TM DMEM(1X)；

补充剂为PEN STREP GLUTAMINE。

7.一种细胞分泌物的制备方法，包括：

按权利要求3～6任一项所述的细胞培养方法培养细胞；

收集培养液上液，分离、纯化得到目的细胞分泌物。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述细胞分泌物选自外泌体、生长因子、细胞因子、胶原提取物、功能性蛋白。

9.一种胶原提取物的制备方法，包括：

S1)按权利要求3～6任一项所述的细胞培养方法对成纤维细胞进行培养；

S2)收集细胞上清液，首次离心，收集上清；

S3)将首次离心得到的上清转入3 KD超滤管，离心得到浓缩上清，在浓缩上清中加入蛋白酶抑制剂、胃蛋白酶并用乙酸调节pH，酶解完成后离心，得酶解上清；

S4)对酶解上清进行盐析，盐析充分后离心，取沉淀清洗除盐，干燥得到胶原提取物。

10.一种护肤品，包括基质，其特征在于：其中添加有权利要求9所述的胶原提取物。