[发明专利]一种三维细胞培养支架、成纤维细胞凝胶及其制备方法

权利要求书

1.一种三维细胞培养支架的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将透明质酸钠交联、冻干后即得到三维细胞培养支架，其中三维细胞培养支架中透明质酸的浓度为13 mg/mL；

所述交联时所用的交联剂为碳化二亚胺、1,4-丁二醇二缩水甘油醚、聚乙二醇、戊二醛、二乙烯基砜和京尼平中的一种或多种；

所述交联剂与透明质酸钠的重量比为1:(3-15)；

所述交联后、冻干前还包括透析，所述透析包括如下步骤，采用透析液去除所述交联剂；所述透析液包括水、平衡盐溶液、生理盐水和磷酸缓冲液；

所述交联的温度为40-65℃，所述交联的时间为1-5 h，所述交联剂溶于碱性溶液中，所述碱性溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠溶液中的一种，所述碱性溶液的质量百分比为0.2-2%。

2.根据权利要求1所述的三维细胞培养支架的制备方法，其特征在于，当透析后支架的重量为透析前支架重量的1-80倍时，即为透析终点。

3.根据权利要求2所述的三维细胞培养支架的制备方法，其特征在于，所述透析后、冻干前还包括灭菌，所述灭菌为纯蒸汽湿热灭菌，所述纯蒸汽湿热灭菌的温度为110-130℃，F₀为8-15。

4.一种如权利要求1-3任意一项所述的三维细胞培养支架的制备方法制备的三维细胞培养支架。

5.一种成纤维细胞凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤，

成纤维细胞培养：取成纤维细胞，加入胰蛋白酶液处理，重复1-4次，加入培养基，再传代培养至新的培养皿内培养24-72 h，得到成纤维细胞悬浮液；

成纤维细胞凝胶制备：将所述成纤维细胞悬浮液与权利要求4所述三维细胞培养支架混合并培养24-96 h，即得到成纤维细胞凝胶。

6.根据权利要求5所述的成纤维细胞凝胶的制备方法，其特征在于，每0.1-1.0 g所述三维细胞培养支架辅以1 mL所述成纤维细胞悬浮液。

7.根据权利要求6所述的成纤维细胞凝胶的制备方法，其特征在于，所述胰蛋白酶液处理的时间为1-2 min，所述胰蛋白酶液中胰蛋白酶的浓度为0.25%，所述传代培养的比例为1:（1-10）。

8.一种如权利要求5-7任意一项所述的成纤维细胞凝胶的制备方法制备的成纤维细胞凝胶。