[发明专利]一种同时对多种HPV亚型进行检测的方法和试剂盒

说明书

本公开提供了一种同时对多种HPV亚型进行检测的方法，所述方法包括以下步骤：(1)任选的预扩增步骤：利用随机引物来预扩增待测样品中的核酸物质；(2)扩增步骤：利用保守引物对来扩增包含特异性区域的片段；(3)杂交步骤：使通过步骤(2)产生的扩增产物与基因芯片杂交；(4)检测步骤：基于所述扩增产物与基因芯片的杂交结果，检测HPV亚型。本公开还提供了一种同时对多种HPV亚型进行检测的试剂盒，所述试剂盒包含基因芯片和如SEQ ID NO:1‑17所示的保守引物对。

技术领域

本公开提供了一种HPV基因分型检测方法，以及HPV基因分型检测试剂盒。

背景技术

宫颈癌是全球女性第二大恶性肿瘤。全世界每年约有53万新发病例，约有31.1万人死于宫颈癌，其中大部分发生在发展中国家。在我国，宫颈癌的发病率和死亡率仅次于乳腺癌，每年新发病例数约为13万例且逐年提升，死亡约为3万例。已有研究表明高危型人乳头瘤病毒(Human Papilloma virus，HPV)是宫颈癌发病的主要原因。目前，宫颈癌是唯一病因明确、可以预防的肿瘤疾病。

HPV的基因组为双链环状DNA分子，包含约7200-8000个碱基对。根据基因序列功能，HPV基因组可分为3个区域，分别是长控制区(LCR)、早期转录区(E区)和晚期转录区(L区)。LCR区含有基因组的复制起点和表达所需的调控元件，参与调控病毒的转录与复制；E区包括E1-E7，负责编码病毒相关蛋白；L区包括L1和L2，编码病毒的主要衣壳蛋白(L1)和次要衣壳蛋白(L2)，L1约占衣壳蛋白的80％，序列高度保守，L2含量较少，变异较多。HPV依据DNA的同源性进行分型，目前已经鉴定出的HPV亚型有200多种。HPV可感染多种组织和器官，已经鉴定出HPV亚型中约有40余种亚型可感染生殖道上皮粘膜，根据致病性不同，HPV可分为低危型和高危型。低危型如HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV44等；HPV16、HPV18、HPV31、HPV56、HPV58、HPV59、HPV68等为高危型大约有19种，其中HPV16和HPV18被认为致病性最强，是宫颈癌的主要致病亚型。

约80％的女性在一生中至少会感染一次HPV，低危型HPV主要导致湿疣类病变，而长期持续性感染高危HPV与宫颈癌变有着密切的关系。由于HPV可在体内潜伏10年甚至更长时间，且不出现任何临床症状，人们很容易忽略HPV检测，这就导致了宫颈癌前病变发展到宫颈癌的过程极为漫长。在临床上将HPV检测纳入常规筛查，通过早期筛查提高HPV早期检出率，可以提高宫颈癌前病变的治愈率，最终预防宫颈癌的发生，降低宫颈癌的发病率。因此，HPV检测及分型在宫颈癌筛查、早期预防、临床诊断及后期治疗等方面具有十分重要的价值。

目前HPV检测方法主要分为非分子水平检测方法和分子水平检测方法，非分子水平检测方法主要有：醋酸白试验、阴道镜检测、宫颈刮片细胞学检查、宫颈和宫颈管活组织检查，这些方法受取材、涂片制作、阅读技术影响，准确率低、假阳性高、重复性差、漏诊率可达30％。分子水平检测方法主要有斑点印迹法、分子导流杂交法、飞行时间质谱法、荧光原位杂交法、Southern杂交法、PCR和杂交捕获法等。斑点印迹法具有放射性，危害检测人员的身体健康。荧光原位杂交法操作流程复杂，对检测人员要求较高。传统PCR检测方法假阳性较高。杂交捕获法试剂盒虽然无需进行PCR即可区分高危型与低危型，但是无法判断具体基因型。Sanger终止法准确度高，但一次只能读取单个基因的序列，不具备高通量特性。

目前市面上的HPV检测产品种类多，大多采用PCR荧光或杂交与其他技术结合的方式，但不同技术间的结合还存在灵敏度、背景、效率的问题，难以对HPV进行准确分型。

发明内容

本公开可以提供一种同时对多种HPV亚型进行检测的方法，该方法包括以下步骤：

(1)任选的预扩增步骤：利用随机引物来预扩增待测样品中的核酸物质；

(2)扩增步骤：利用保守引物对来扩增包含特异性区域的片段；