[发明专利]一种基于MIRA荧光法快速检测PCV3病毒的引物和探针

说明书

本发明涉及PCV3病毒检测技术领域，且公开了一种基于MIRA荧光法快速检测PCV3病毒的引物和探针，包括四对引物和一个探针，四对引物和一个探针的基因序列具体如下：第一对引物：PCV3‑MIRA‑F1：5'‑GTACCAGATCGGATCTTCAAGCAGCAGCT‑3'；PCV3‑MIRA‑R1：5'‑GCAATTCATCAAATGGAACCCACCCATAA‑3'；本发明解决了聚合酶链式反应最后需要核酸胶电泳呈现结果，耗时较长，实时荧光定量PCR需要昂贵的热循环仪，对精密仪器依赖度高，需要专业的技术人员操作和判读结果，在基层和现场的检测应用受到很大限制，等温核酸技术中的LAMP方法需要多对引物，对靶基因的要求高，容易出现假阳性的问题。

技术领域

本发明涉及PCV3病毒检测技术领域，具体为一种基于MIRA荧光法快速检测PCV3病毒的引物和探针。

背景技术

现已有的检测PCV3的方法包括病毒分离鉴定，血清学检测，分子生物学试验等。随着分子生物学技术的发展，目前常用的检测方法包括聚合酶链式反应(PCR)，实时荧光定量PCR，环介导等温扩增(LAMP)等方法，然而聚合酶链式反应(PCR)最后需要核酸胶电泳呈现结果，耗时较长；实时荧光定量PCR缩短了检测时间，但需要昂贵的热循环仪，对精密仪器依赖度高，需要专业的技术人员操作和判读结果，在基层和现场的检测应用受到很大限制，整体实验时间在1-2小时；等温核酸技术中的LAMP方法克服了PCR技术需要昂贵的设备仪器等缺点，具有操作简便，结果判断简单等优点，但是需要多对引物，对靶基因的要求高，容易出现假阳性，且时间约在1小时。多酶恒温核酸快速扩增技术(MIRA)在常温39℃20分钟内即可完成扩增，操作简便，特异性高，配备便携式的恒温荧光检测仪，在资源匮乏的边远地区、试验室条件不足的基层也可做到对猪圆环3型病毒的快速检测。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种基于MIRA荧光法快速检测PCV3病毒的引物和探针，解决了上述背景技术中所存在的问题。

(二)技术方案

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种基于MIRA荧光法快速检测PCV3病毒的引物和探针，包括四对引物和一个探针，四对引物和一个探针的基因序列具体如下：

第一对引物：

PCV3-MIRA-F1：5'-GTACCAGATCGGATCTTCAAGCAGCAGCT-3'；

PCV3-MIRA-R1：5'-GCAATTCATCAAATGGAACCCACCCATAA-3'；

第二对引物：

PCV3-MIRA-F2：5'-GGGGGATTACCTCGAGATTGGCGAAGATT-3'；

PCV3-MIRA-R2：5'-GTTTACCCAACCCCATCACCCCGCAAAAA-3'；

第三对引物：

PCV3-MIRA-F3：5'-CTTCGGGTACCAGATCGGATCTTCAAGCAGCAG-3'；

PCV3-MIRA-R3：5'-CCTGTCCCCAATTCTCAGCAATTCATCAAATGGA-3'；

第四对引物：

PCV3-MIRA-F4：5'-AGATTCCTCTTCGGGTACCAGATCGGATCTTCAA-3'；

PCV3-MIRA-R4：5'-GTTTACCCAACCCCATCACCCCGCAAAA-3'；

探针序列：