[发明专利]一种检测17 β-雌二醇的电化学传感器及其制备和使用方法

权利要求书

1.一种检测17β-雌二醇的电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）配制ADA（金刚烷）的甲醇溶液，与甲醇钠的甲醇溶液反应至沉淀析出，经洗涤、真空干燥后得水溶性金刚烷羧酸钠盐；再将EDC、NHS和水溶性金刚烷羧酸钠盐的混合溶液加至AF1中，振荡过夜后，将形成的混合物离心洗涤得AF1- ADA探针；其中AF1的序列为5′-NH₂-AAGGGATGCCGTTTGGG-3′；

（2）将HAuCl₄水溶液在搅拌下加热至沸腾，然后加入柠檬酸钠溶液，回流煮沸15min，冷却至室温得到AuNPs溶液，然后再加入AF2溶液，搅拌24 h得AF2-AuNPs探针；其中AF2的序列为5’-CCCAAGTTCGGCATAGTG-SH-3’；

（3）将电极浸入含有0.01 M β-CD的 PBS溶液中，通过CV法将β-CD聚合到电极表面，得β-CD/电极；

（4）通过金刚烷和环糊精的主客体识别作用将步骤（1）的AF1-ADA探针组装到步骤（3）的β-CD/电极上，然后在含有相同浓度的ON1和AF2-AuNPs溶液中孵育45 min，形成AF1-ADA/ON1/AF2-AuNPs刚性双链结构，即为AF1-ADA/ON1/AF2-AuNPs/β-CD/电极电化学适配体传感器；其中ON1为DNA1，其核苷酸序列为5′-AAGCTTGGGCCATGCCCAGGAAGGACCCAAACGG-3′。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中ADA、甲醇钠的质量比为1:0.3；每1 OD AF1溶液中添加0.2- 0.6 g EDC、100-300 µL 0.1 M NHS及500 -1500µL金刚烷羧酸钠盐溶液，其中金刚烷羧酸钠盐溶液的浓度为0.5 M。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中HAuCl₄水溶液与柠檬酸钠溶液的体积比为50:1，HAuCl₄水溶液的质量体积比浓度为0.01%，柠檬酸钠溶液的质量体积比浓度为2%。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中AuNPs溶液与AF2溶液的体积比为1:9，其中AF2溶液的浓度为10 μM。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中电极为GCE或LSG；其中制作LSG电极的CO₂激光的波长为10.6μm，激光速度为0.45 cm/s，功率为2.7 W，每英寸激光脉冲(PPI)为1000，透镜衬底距离为5.1cm；LSG电极上设有3个电极，其中工作电极的直径为2mm，银浆的参数为5000导电胶，稀释剂8260，60℃下固化30分钟；制作GCE依次采用1.0、0.3、0.05 μm的三氧化二铝抛光粉处理，将电极表面打磨成镜面，用乙醇和去离子水清洗以去除残留的Al₂O₃粉末，最后在双蒸馏水中连续超声，室温下干燥。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中PBS溶液的参数为pH7.4、0.1 M， CV法的条件为，扫速 20mv/s，电压 -1.0 ~ +1.0 V，圈数 10圈。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中DNA1和AF2-AuNPs的物质的量均为1×10^-6 M。