[发明专利]一种特异性抗体递送平台及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种特异性抗体传送平台及其制备方法和应用，所述特异性抗体传送平台制备方法为以NK细胞为靶点，通过对四氧化三铁纳米颗粒表面进行修饰，在偶联剂的作用下，使四氧化三铁纳米颗粒与特异性识别NK细胞的抗体经化学键合结合而成。该特异性传送平台，通过化学键合的方式将抗体与颗粒结合更稳定，可特异性识别NK细胞并与之结合，在磁场作用下还能进一步促进NK细胞迁移，从而可以快捷高效地实现NK细胞在肿瘤部位的富集，能够明显提高免疫治疗效果。预示其在医学检测、血液筛查、靶向药物制备中具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，特别是涉及一种特异性抗体递送平台及其制备方法和应用。

背景技术

NK细胞是固有免疫系统的重要组成部分。NK细胞具有多种免疫功能，既能直接实现细胞杀伤又能分泌促炎因子，增强机体免疫反应。NK细胞对肿瘤细胞具有直接杀伤能力，基于NK细胞的抗肿瘤免疫疗法在21世纪发展迅速。虽然这些疗法还没有像过继性T细胞疗法一样在临床上取得巨大成功，但临床前和临床实验的成果都凸显了基于NK细胞治疗肿瘤的巨大潜力。在NK细胞发挥作用的过程中，NK细胞需要在促炎因此的作用下富集在肿瘤部位，随后通过“missing self”方式识别肿瘤，并通过颗粒酶、穿孔素直接杀死肿瘤细胞，或通过释放TNF和INF-γ等细胞因子发挥作用。因此，通过增强NK细胞在肿瘤部位的富集，利用NK细胞的非特异性杀伤能力，在肿瘤部位实现对肿瘤细胞的杀伤，以此来实现治疗肿瘤的效果。

目前已有的基于NK细胞的抗肿瘤免疫疗法包括三种：第一种是通过细胞因子或抗体激活NK细胞表面受体，增强NK细胞在肿瘤部位的杀伤能力，但由于细胞因子与抗体会分布在全身各处，可能会导致比较严重的副作用；第二种是通过在NK细胞表面修饰CAR来增强NK细胞识别肿瘤细胞的能力，增强其在肿瘤部位的富集，但CAR-NK的局限是只能用于治疗特异性抗原已知的肿瘤，但目前大部分肿瘤的特异性抗原都是未知的，这种方法没有充分利用NK细胞的非特异性杀伤能力；第三种是异体过继性NK细胞转移，通过增多体内NK细胞的总量来增强NK细胞在肿瘤部位的富集，但缺点是回输的NK细胞表面的KIR可能无法被正常组织细胞的HLA识别，导致副反应；另外回输的NK细胞纯度也无法保证，为了提高NK细胞的纯度，不可避免地会减少分选效率，为细胞的原始采集造成更大的负担。

因此，如果可以提高体内自身NK细胞在肿瘤部位的富集，则在促进NK细胞在肿瘤部位发挥作用的同时，也可以避免以上种种副反应。但不幸的是体内细胞迁移的调控手段目前还不成熟，还有很多未知待探索。

发明内容

基于此，本发明的目的之一在于提供一种特异性抗体递送平台，其可与NK 细胞结合并能促进NK细胞迁移，预示其在医学检测、血液筛查、靶向药物制备中具有广泛的应用前景。

实现上述目的的具体技术方案如下：

一种特异性抗体传送平台的制备方法，所述特异性抗体传送平台的制备方法为以NK细胞为靶点，通过对四氧化三铁纳米颗粒表面进行修饰，在偶联剂的作用下，使四氧化三铁纳米颗粒与特异性识别NK细胞的抗体经化学键合结合而成。

在其中的一些实施例中，上述制备方法，包括以下步骤：

(1)将表面羧基化的四氧化三铁纳米颗粒在水溶液中调节到合适的浓度，通过1-(3-二甲基氨丙基)-3-3乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺进行活化反应1小时，将颗粒表面部分羧基转化成活性酯；

(2)将步骤(1)得到的颗粒水溶液和特异性识别NK细胞的抗体水溶液按一定比例混合，4℃反应12小时；

(3)将所述纳米颗粒分离纯化，得到抗体修饰的磁性纳米颗粒。

在其中的一些实施例中，上述步骤1中的四氧化三铁纳米颗粒的浓度为 0.5mg/mL；上述EDCI的使用浓度为0.05-5mmol/L，优选为0.5-1.5mmol/L；上述NHS的使用浓度为0.075-7.5mmol/L，优选为0.75-2.25mmol/L。