[发明专利]一种促进创伤愈合贴片及其制备方法

说明书

本发明公开了一种促进创伤愈合贴片的制备方法。本发明采用超低温细胞裂解技术，结合连续流离心分离出MSCs中对创面愈合有促进作用的活性成分，通过优化创伤愈合的活性成分的工艺参数，最终得到促进创伤愈合活性成分，将该成分结合在载体贴片上冻干，即可提供一种现货的促进创伤愈合的含干细胞活性成分的贴片，制备方法简单，对仪器要求不高，适合量产，使用便捷，本发明贴片采用脐带间充质干细胞作为活性成份，使用过敏率低，适用范围。

技术领域

本发明主要涉及外用医药的技术领域，具体地说，本发明涉及一种促进创伤愈合贴片及其制备方法。

技术背景

创伤修复一直是医学领域的热点问题。在我国，每年因糖尿病、血管硬化等导致的创面患者有数千万之多，皮肤作为人体最大的器官，是机体抵御外界侵害的第一道防线，同时也最易产生破溃缺损或功能缺失。皮肤的创面修复是一个复杂而有序，需要多种细胞和活性分子协同参与的过程。虽然目前全层皮肤移植和组织工程皮肤技术日趋完善，但仍存在一系列亟待解决的问题，如：异体皮肤移植后的免疫排斥反应；自体皮肤供皮区的二次损伤；愈合后瘢痕大量增生以及皮肤附属器无法完全再生导致的皮肤畸形或功能障碍。因此，促进创面无瘢痕愈合，实现皮肤形态及功能兼备的修复成为临床和科研亟待解决的紧迫任务。

间充质干细胞作为一类具备多向分化潜能的成体干细胞，目前已成为细胞治疗，免疫调节和组织工程等多个领域的研究热点。MSCs最初被定义为成纤维细胞集落形成单位(fibroblast colony-forming units,CFU-Fs)，于1976年由Friedenstein等人率先通过贴壁培养法从骨髓单个核细胞中分离得到。作为一种中胚层来源的细胞MSCs，不仅能在适宜条件下分化为大多数中胚层细胞，如成骨细胞、成脂肪细胞以及成软骨细胞，还能够跨胚层分化为神经细胞，肝细胞和表皮细胞等内胚层和外胚层细胞。MSCs来源广泛，目前已证实能够从骨髓、脂肪、脐带等多种组织中分离得到，并且不易引发机体的排斥反应，目前将MSCs应用于多种难治性疾病的相关成果不断涌现，如心肌梗死，急性肾损伤，以及创面愈合中。

脐带间充质干细胞(MSCs)存在新生儿脐带中，具有自我更新能力及多向分化潜能，其遗传背景较为稳定，置入人体后免疫排斥风险较低。MSCs在创面愈合中主要体现在其能够在部分生长因子的支持下，对其自身周围细胞进行刺激，且将其分成特化细胞，特化细胞包括肌肉细胞、神经元、软骨细胞和角质形成的细胞。在诸多细胞因子中皮肤中表皮干细胞是极为重要的，比如干细胞生长因子、角质形成细胞生长因子等。同时，MSCs能够在促炎细胞因子抑制的作用下，刺激和调节T细胞因子，实现对抗炎物质IL-10的增强，最终促进内皮细胞的分化，生成新的血管。

目前应用的MSCs多以活细胞形式注射或涂抹，由于细胞或因子存储条件苛刻，常温下无法实现现货供应，如何实现常温下现货供应成为MSCs应用中亟待解决的问题。

发明内容

本发明针对现有技术中促进创伤愈合的活性成分多以活细胞形式注射或涂抹，由于细胞或因子存储条件苛刻，常温下无法实现现货供应的技术问题，且未见有文献和专利报道促进创伤愈合的活性成分在贴片中的应用。本发明旨在于可提供一种现货的促进创伤愈合的含干细胞活性成分的贴片及其制备方法。本发明采用超低温细胞裂解技术，结合连续流离心分离出MSCs中对创面愈合有促进作用的活性成分，通过优化创伤愈合的活性成分的工艺参数，最终得到促进创伤愈合活性成分，将该成分结合在载体贴片上冻干，即可提供一种现货的促进创伤愈合的含干细胞活性成分的贴片，制备方法简单，对仪器要求不高，适合量产，使用便捷，本发明贴片采用脐带间充质干细胞作为活性成份，使用过敏率低，适用范围。

本发明具体提供一种促进创伤愈合贴片，其制备方法包括以下步骤：

(1)采用无异种动物源成分的mTeSR1人ESC/iPSC培养基，以无饲养层细胞的培养方式培养脐带间充质干细胞，培养条件为37℃，5％-10％O₂及10％-15％CO₂，每天换液，培养15天。