[发明专利]一种普适性可注射微波增敏免疫凝胶的制备方法

说明书

一种普适性可注射微波增敏免疫凝胶的制备方法，步骤如下：(1)将海藻酸钠粉末于水中搅拌溶解得到溶液A；(2)将免疫刺激剂添加到步骤(1)所得的溶液A中继续室温下搅拌得到溶液B；(3)向步骤(2)所得的溶液B中缓慢滴加CaCl₂水溶液，边滴加边搅拌，即可获得均匀稳定的免疫凝胶；(4)最终将产品置于4℃保存。该免疫凝胶制备方法步骤简单、条件温和、即混即用，便于大规模商品化生产。所得凝胶具有良好的生物安全性、可注射性、微波增敏能力及显著的免疫激活能力，可用于普适性微波消融‑免疫联合抗肿瘤治疗，具有良好的应用价值及临床转化前景。

技术领域

本发明涉及水凝胶的制备和应用领域，特别是兼有微波热疗增敏、免疫激活和高效抗肿瘤治疗效果的免疫凝胶的制备方法。

背景技术

经皮微波消融是一种临床广泛使用的局部肿瘤消融治疗方法，其主要通过插入肿瘤组织内的微波电极产生电磁场，驱使肿瘤组织内的极性分子不断摩擦产热，从而促进肿瘤组织发生凝固性坏死，最终达到消融肿瘤的目的。相比于传统的外科手术治疗，微波消融具有微创、高效、并发症少等显著优势。尽管如此，肿瘤患者微波消融术后依然存在肿瘤进展与复发的风险。研究显示，肿瘤患者微波消融术后局部和远处3年复发率分别为10％-13％和27％-59％。因此，如何有效抑制微波消融术后肿瘤复发及转移成为临床中亟需解决的难题。

免疫治疗是指利用自身免疫系统杀伤肿瘤细胞的一种治疗方法，在防止肿瘤复发和远处转移方面显示出巨大的潜力。事实上，在微波消融过程中本身就会释放大量细胞碎片(含有丰富的肿瘤相关抗原)，同时募集各种炎性细胞，例如树突状细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞和T淋巴细胞等。这为机体免疫细胞识别、提呈肿瘤抗原并发挥肿瘤疫苗样功能提供了一个天然的绝佳机会。然而，由于受限于肿瘤免疫微环境固有的抗原提呈效率低、免疫刺激信号弱以及免疫耐受等特点，微波消融诱导的抗肿瘤免疫应答还远不足以高效预防肿瘤复发和远处转移。因此，将免疫治疗与微波消融联合有望解决临床工作中微波消融术后局部肿瘤复发及远处转移的棘手问题，从而改善患者预后。

目前，各种局部和系统性免疫治疗策略被应用于微波消融后的联合抗肿瘤治疗，例如免疫检查点封锁疗法、细胞因子疗法、免疫细胞疗法、疫苗疗法以及免疫佐剂疗法。然而，目前这些免疫治疗策略各自都面临着一些挑战，例如需要精心设计包封载体、复杂的细胞工程、令人担忧的生物安全性以及难以令人满意的普适性。以目前最热门的免疫检查点封锁疗法为例，通过靶向CTLA-4、PD-1以及PD-L1等细胞表面分子，该疗法已经在多种肿瘤(如非小细胞肺癌、恶性黑色素瘤等)的治疗上取得了令人瞩目的临床治疗效果。尽管如此，免疫检查点封锁疗法依然存在难以避免的缺陷，比如仅对部分患者或者肿瘤类型有效、严重的系统性副作用、冗杂的基因筛查过程，因此仅有少部分患者适用于该疗法。最近，以肿瘤本身作为抗原来源辅以免疫佐剂的原位肿瘤疫苗疗法吸引了越来越多的关注，尤其是在光学-免疫联合治疗以及放疗-免疫联合治疗等方面。免疫佐剂是一类特殊的免疫刺激化合物，可通过促进抗原呈递、放大激活信号、减轻免疫耐受来提高抗肿瘤免疫应答的质量，具有更普遍的适用性。由于每种肿瘤都有一组独特的肿瘤相关抗原和肿瘤新抗原，免疫佐剂介导的原位疫苗疗法可以充分利用微波消融后的所有肿瘤相关抗原，而无需鉴定和选择特定的疫苗抗原。由此可见，免疫佐剂联合微波消融不仅可以有效地消除原发肿瘤，而且可以充分利用所有释放的肿瘤抗原进行原位免疫激活，产生高度特异性的抗肿瘤免疫应答。然而，许多免疫佐剂都是疏水性分子(如FDA批准使用的的咪喹莫特R837等)，需要精心构建载体以增加其生物利用率。因此，发展一种简单、通用且极具临床转化前景的递送策略用于疏水性免疫佐剂的原位高剂量给药和长时间滞留是目前微波消融-免疫联合抗肿瘤治疗策略中亟需解决的关键问题。

发明内容

本发明的目的是为了解决目前微波热疗-免疫治疗过程中存在的复杂细胞工程、需要精心设计包封载体以及适用范围局限等问题，提供一种普适性可注射微波增敏免疫凝胶的制备方法。