[发明专利]一株定植于猪鼻腔的枯草芽孢杆菌及其抗病毒活性的应用

说明书

本发明公开了一株定植于猪鼻腔的枯草芽孢杆菌及其抗病毒活性的应用。本发明涉及的猪源枯草芽孢杆菌NS15，保藏编号为CGMCC No.20344。所述的枯草芽孢杆菌NS15在制备治疗和/或预防猪流行性腹泻病毒的鼻腔给药制剂中的应用。所述的枯草芽孢杆菌NS15在制备增强猪鼻腔黏膜先天性免疫的益生菌制剂中的应用。通过体内外试验首先证明枯草芽孢杆菌NS15在猪鼻腔黏膜中具有较好的粘附和定植能力，能通过分泌细胞外基质成分粘附PEDV，阻止病毒入侵宿主细胞，能诱导仔猪产生高效的鼻腔黏膜先天性免疫反应。综上，该枯草芽孢杆菌菌株有望开发成为抵御病毒经鼻入侵感染机体的一种益生菌制剂。

技术领域

本发明涉及一株定植于猪鼻腔的枯草芽孢杆菌及其抗病毒活性的应用，属于生物防控技术领域。

背景技术

1.传染性病原通过猪鼻腔感染的研究现状

引起猪传染病的病原微生物绝大多数通过呼吸道和消化道黏膜入侵，其中经呼吸道感染尤其是通过鼻腔入侵机体的的病原近年来在我国引起了广泛关注，如猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine respiratory and reproductive syndrome virus，PRRSV）、猪伪狂犬病毒（Porcine pseudorabies virus，PRV）、猪流感病毒（Swine influenza virus，SIV）、猪肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae of swine，MPS）、猪流行性腹泻病毒（Porcineepidemic diarrhea virus，PEDV）以及副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，Hp）等。这些病原微生物能通过飞沫和空气传播，在猪群中易形成爆发性疫情，给防控带来巨大挑战，严重阻碍我国养猪业的发展。

2. 猪鼻腔黏膜免疫的研究现状

鼻腔黏膜作为上呼吸道直接与外界相通的部位，是许多病原入侵和感染的重要入口。通过在鼻腔诱导黏膜免疫反应能直接切断病原微生物的入侵途径，对于呼吸道传染病的有效预防具有重要意义。研究发现鼻腔免疫不仅能有效诱导呼吸道局部黏膜免疫反应，其还兼具抗原使用量少、免疫反应阈值低、对动物产生的应激反应小且不受消化酶降解等优点，这使得近年来鼻腔免疫在动物疫病的防控中受到广泛关注，目前国外已有应用鼻腔黏膜免疫来预防PRRSV、PRV和SIV等猪呼吸道传染性疾病的研究报道。

猪鼻腔黏膜在长期进化下形成了较强的黏膜先天性免疫力，能够抵抗多种病原的入侵。但最近的研究发现，随着大型集约化养殖业的发展，猪鼻腔黏膜先天性免疫力逐渐退化，抵抗病原入侵的能力明显降低。相反，生态放养的猪群仍维持较高的鼻腔黏膜免疫水平，其对多种病原感染都具有较强的抵抗力。这主要是由于野外土壤中分布有种类复杂的微生物，野外放养的猪群通过与自然环境中的微生物频繁接触，使得较多有益微生物进入并定植于鼻腔前庭中，诱导鼻腔黏膜产生高水平的先天性免疫保护力。

3. 枯草芽孢杆菌作为益生菌的研究现状及应用

枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是广泛存在于土壤和植物中的优势生物种群，隶属于芽孢杆菌科、芽孢杆菌属。该菌具有较强的抗逆性和生存能力，且因其能显著增强肠道黏膜免疫力，被作为饲料添加剂广泛使用。但由于鼻腔黏膜物理屏障的存在如黏液的分泌，导致一些枯草芽孢杆菌进入鼻腔后难以在黏膜处定植，无法维持长效的免疫增强作用。

4. 猪鼻腔上皮细胞离体培养模型的研究现状及应用