[发明专利]纯化FSH方法

说明书

本发明涉及蛋白领域，具体的本发明提供了一种新的纯化FSH的方法，包括步骤：S1)提供FSH液体，将所述FSH液体进行亲和层析，得到第三样品；S2)将所述第三样品进行疏水层析得到所述第四样品；S3)将所述第四样品进行阴离子层析，得到所述纯化的重组人FSH。本发明纯化方法制备所得的FSH蛋白收率高，亚基解离少，适用于商业应用。

技术领域

本发明涉及重组蛋白领域，具体涉及重组人促卵泡素的纯化方法。

背景技术

卵泡刺激素又称促卵泡激素(Follicle Stimulating Hormone，FSH)，是由垂体前叶嗜碱性细胞合成和分泌的一种糖蛋白类促性腺激素，受下丘脑分泌的促卵泡激素释放激素控制，FSH是一种异源二聚体糖蛋白，由非共价结合的α亚基和β亚基组成，一般认为α亚基主要负责信号传导，β亚基主要与生理功能有关，α亚基和β亚基单独都不具有生物活性，二者结合在一起引起结构变化，才具有生物活性，其生理功能是促使卵巢(或精巢)发育，促进卵泡(或精子)的生成和释放。

目前，中国市场产品主要有尿源性促排卵激素(P-FSH)和重组促排卵激素(rhFSH)，均能诱发排卵和促进精子生成。尿源性促排卵激素是从经绝后妇女尿中提取的人卵泡刺激素，因尿中提取的卵泡刺激素易受尿中LH(促黄体生成素)污染，影响疗效，尿源性促排卵激素(P-FSH)有逐渐被重组人FSH(rhFSH)所代替的趋势，这对重组人FSH的生产工艺提出了新的要求。

由于卵泡刺激素是有生物活性的异源二聚体糖蛋白，FSH的α亚基和β亚基在生产及储存过程中均可能产生亚基的解离，从而影响其活性。研究发现FSH对pH敏感，pH改变易发生亚基解离，失去生物活性。即便是现有技术中采用优化生产工艺制备卵泡刺激素，仍然无法很好去除卵泡刺激素的解离亚基。

因此，本领域需要开发一种满足生产要求，能够去除卵泡刺激素解离亚基的方法，同时能增加卵泡刺激素制剂的纯度，提高卵泡刺激素制剂的质量。

发明内容

本发明的目的是提供一种步骤简单，适合商业化大生产的，解离亚基少，产品收率高，产品纯度高的重组人FSH制备方法

在本发明的第一方面，提供了一种重组人FSH纯化方法，包括步骤：

S1)提供FSH液体，将所述FSH液体进行亲和层析，得到第三样品；

S2)将所述第三样品进行疏水层析得到所述第四样品；

S3)将所述第四样品进行阴离子层析，得到所述纯化的重组人FSH。

在另一优选例中，所述步骤S1)中亲和层析包括步骤：

Q1)提供平衡缓冲液，所述FSH液体上样前用平衡缓冲液平衡层析柱；

Q2)重复步骤Q1)2-3次，得到第一样品；

Q3)提供淋洗液，用所述淋洗液淋洗第一样品，得到第二样品；

Q4)提供洗脱液，洗脱所述第二样品，收集洗脱液，得到所述第三样品。

在另一优选例中，所述平衡缓冲液为20mM PB，1～150mM NaCl。

在另一优选例中，所述淋洗优选为20mM Tris-HCl，1M NaCl(pH 7.2)。

在另一优选例中，所述步骤S2)中疏水层析包括步骤：将所述第三样品上样后进行梯度洗脱，收集洗脱液得到所述第四样品。

在另一优选例中，所述洗脱液缓冲液选自：20mM PB，1.25M(NH₄)₂SO₄(pH7.0)；20mMPB(pH7.2)；或其组合。