[发明专利]一种甘蓝型油菜根肿病抗性特异分子标记及其应用

说明书

本发明属于油菜分子育种技术领域，尤其涉及一种甘蓝型油菜根肿病抗性特异分子标记及其应用。本发明鉴定到一个与甘蓝型油菜根肿病抗性显著关联的多态性位点，位于A3染色体21,271,455bp处，存在T/C突变，针对该突变位点开发了KASP标记，经群体验证，该标记能将94个单株划分成三种类型GenotypeⅠ、GenotypeⅡ、GenotypeⅢ，三种类型间对根肿菌的抗性反应(病情指数)差异达到极显著水平，能从基因型水平有效区分抗感材料。本发明所提供的分子标记可以作为抗根肿病甘蓝型油菜育种标记辅助选择，为培育遗传稳定的抗根肿病油菜新品种提供新的分子标记。

技术领域

本发明属于油菜分子育种技术领域，尤其涉及一种甘蓝型油菜根肿病抗性特异分子标记及其应用。

背景技术

油菜作为我国第一大油料作物，年产量达540万吨(FAO，2019)，且双低菜籽油在大宗食用植物油中脂肪酸组成最为合理，被公认为是最健康的保健型食用油(王汉中，2018)，因此油菜安全生产对保障我国食用油供给安全至关重要。然而近年来，我国油菜主产区根肿病大面积爆发，致使我国部分地区油菜产量和品质严重下降，严重威胁优质菜油供给。根肿病，俗称十字花科“癌症”，是由根肿菌(Plasmodiophora brassicae Wor.)引起的一种专性寄生于十字花科植物的世界性土传病害。研究表明甘蓝型油菜感染根肿菌后可致产量下降30-100％(Hwang et al.,2012)，种子含油量下降4.7-6.1％(Engqvist,1994)，造成年经济损失达1.3亿余元(贾茹，2019)。因此，筛选抗病资源，开发抗病标记是有效防控油菜根肿病，确保我国油菜产业可持续发展的重大需求。

目前在甘蓝型油菜祖先种白菜中已克隆到3个抗根肿病基因：CRa(A3,Ueno etal.,2012)、Crr1a(A8,Hatakeyama et al.,2013)以及CRb(A3,Hatakeyama et al.,2017)，均被鉴定为TIR-NB-LRR家族抗性基因，通过序列比较和功能分析发现，CRa和CRb实际上是同一个基因(Hatakeyama et al.,2017)。甘蓝型油菜中抗根肿病资源匮乏，抗病研究相对滞后，严重阻碍了抗根肿病育种的进展。华中农业大学张椿雨教授课题组通过回交和分子标记辅助选择，将ECD04(芜菁)抗性位点PbBa8.1以及白菜抗病基因CRb分别定向转育到油菜常规品种“华双5号”及杂交种“华油杂62”的恢复系中，成功培育出了我国首个甘蓝型油菜抗根肿病常规新品种“华双5R”(战宗祥等，2015)及杂交新品种“华油杂62R”(江莹芬等，2018)。在天然的甘蓝型油菜中开发更多用于资源筛选鉴定和辅助育种的分子标记对于我国甘蓝型油菜抗根肿病育种来说迫在眉睫。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种甘蓝型油菜根肿病抗性特异分子标记及其应用，目的在于解决现有技术中的一部分问题或至少缓解现有技术中的一部分问题。

本发明是这样实现的，一种甘蓝型油菜根肿病抗性特异分子标记，所述分子标记为在甘蓝型油菜A3染色体21,271,455bp处存在的T/C突变。

本发明还提供了一种甘蓝型油菜根肿病抗性检测KASP标记，所述KASP标记的引物序列为：

CR-28669-F1：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTAGCTGCTACACACTCGGCCT(HEX)；

CR-28669-F2：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTAGCTGCTACACACTCGGCCC(FAM)；

CR-28669-R：GCTGGGGAAAGTTGTTCAATATG。

本发明还提供了一种甘蓝型油菜根肿病抗性检测方法，利用上述的引物对样品DNA进行扩增，根据荧光信号判断样品抗性类型。